Tecnica De Chip Seq, Micrornas Y Mecanismos Epigenicos

Chipseq
La técnica conocida como ChipSeq permite la identificación de sitios a los que se une un factor de transcripción en el ADN. El descubrimiento de estos sitios de unión es de gran importancia médica si se trata de proteínas de interés biológico o terapéutico. En cada estado celular existe un conjunto específico de factores de transcripción unidos al ADN para regular la expresión génica yadaptarla a ese estado funcional. La técnica ChipSeq combina la inmunoprecipitación de cromatina con secuenciación en paralelo a gran escala. En la técnica ChipSeq en un primer paso se provoca la asociación covalente al ADN de las proteínas que ya están unidas al ADN por uniones no covalentes mediante tratamiento con formaldehido u otro compuesto químico. Posteriormente se fracciona la molécula deADN con ultrasonidos. A continuación se emplea un anticuerpo específico para la proteína de interés que permite obtener, por inmunoprecipitación, los complejos proteína-anticuerpo unidos al ADN. Este ADN es liberado del complejo y secuenciado de forma masiva y rápida por la tecnología Solexa, que permite la lectura de moléculas cortas de ADN. Comparando las secuencias de los fragmentos de ADN alos que estaba unida la proteína, se puede determinar cuál es el “motif” de la secuencia diana reconocida. Esta información puede ser muy útil en el diseño de nuevos fármacos y en el estudio de enfermedades en las que la alteración de las redes transcripcionales juega un papel clave como pueden ser el cáncer o los procesos autoinmunes.
MicroRNAs
Reguladores clave de la expresión génica.
Eldescubrimiento de nuevos sistemas de regulación génica bajo el control de RNA pequeños ha tenido un impacto significativo en la biología molecular. Los Micro-RNA (miRNA) son una clase de RNA pequeños no codificantes (aquellos que no codifican para proteínas) que regulan la expresión génica pos-transcripcional. Se unen por apareamiento imperfecto a sus RNA mensajeros blanco (RNAm) , generalmente en laregión 3´-no traducible, bloqueando la síntesis de proteínas por desestabilización del RNAm y represión traduccional. Un gran número de miRNA han sido identificados en el genoma de varias especies incluyendo el humano, y el número de miRNA sigue incrementándose debido a los esfuerzos combinados de la biología molecular y a la predicción bioinformática. Se ha descrito que estas moléculas regulanfunciones celulares, por lo que no es sorprendente que los miRNA estén implicados en una gran variedad de enfermedades, como el cáncer y la diabetes mellitus. El propósito de esta revisión es brindar información actualizada sobre la síntesis de los miRNA y los avances en el entendimiento de los mecanismos de silenciamiento génico mediados por los miRNA, así como su uso potencial para el diagnósticode enfermedades y su terapia.
Los organismos eucariotas disponen de un repertorio variado de transcritos pequeños no codificantes (RNA que no codifican para proteínas) de aproximadamente 21-25 nucleótidos (nt);1 cuyo papel como reguladores de la expresión génica es determinante en procesos de diferenciación celular y desarrollo, proliferación, adquisición y mantenimiento de un fenotipo dado, entremuchos otros.2, 3 Estos RNA pequeños asociados a complejos multienzimáticos son guiados para el reconocimiento de secuencias complementarias en RNA mensajeros blanco (RNAm). La interacción funcional entre ambos deriva en la degradación del RNAm y en la represión traduccional y, en algunos casos, pueden causar modificaciones epigenéticas. 4, 5 En función de su origen y tamaño, los RNA pequeños seclasifican en varios grupos. Recientemente, un grupo de estos RNA, llamados microRNA (miRNA), ha cobrado gran importancia en el estudio de la regulación génica. 2, 6 El primer miRNA descrito fue lin-4 que regula los diferentes estadios del desarrollo de la larva C elegans. 7, 8 Desde entonces un gran número de miRNA han sido identificados en el genoma de varias especies incluyendo al humano, y...