Tecnica De Recuento De Microorganismos

TECNICAS DE RECUENTO DE MICROORGANISMOS
MABEL LORENA BOTELLO
DAILY MILEY PABON PARADA
RAFAEL ALBERTO GELVEZ
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JOSE ALFONSO VERA
UNIVERSIDAD FRANCISO DE PAULA SANTANDER
FACULTAD CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE
INGENIERIA AMBIENTAL

RESUMEN

Las técnicas de recuento de microorganismos es un factor muy importante al momento de conocerlas fases de adaptación (exponencial, estacionaria y muerte), que se pueden encontrar en la curva de crecimiento con relación al tiempo y cantidad celular; el conteo de microorganismos se logra por tres métodos diferentes tales como: cámara de neuvauber, en placa y turbidimetria, utilizando el primer método se da inicio al recuento de levaduras disueltas en 10ml de medio polisacárido, del cual setoma la muestra y se pone en las ranuras de la cámara utilizando una pipeta ;sobre la cámara y por capilaridad la muestra se distribuye, posteriormente se acondiciona el microscopio con el aumento más adecuado, se cuentan la células con centro oscuro presentes en cada división de la rejilla correspondiente, luego se suman y se dividen obteniéndose el promedio el cual se multiplica por laconstante de la cámara y el numero exponencial de la disolución, siendo la cell/ml las unidades de cantidad cuando se utiliza la cámara. para el recuento de bacterias se utilizara el método de placa duplicada por disolución, este procedimiento varia ya que la muestra se inocula y se distribuye en placas las cuales se le adiciona agar EMB seguido de movimientos en ocho. El medio se deja a unatemperatura de 47 grados no siendo mayor ya que el microorganismo en causa puede morir, después de la incubación las muestras plaqueadas (sembradas) se colocan en posición invertida y se dejan a una temperatura de 37 grados durante 24 horas, se inicia al cálculo con el conteo de colonias de cada placa se suman las colonias y se dividen para obtener el promedio que se multiplica por la disolución,el resultado lo obtendremos en ufc/ml. Este método maneja un criterio a tener en cuenta de 30 a 300 colonias en bacterias y 10 a 100 colonias para hongos y levaduras de lo contrario los resultados no serán los esperados.

Existen diferentes métodos para cuantificar el número o peso (biomasa) de células microbianas en un cultivo; los métodos pueden ser directos e indirectos. Entre los directosse mencionan la determinación de peso seco y el recuento de células en cámara de Neubauer.
La determinación de peso seco es un método de cuantificación muy utilizado en cultivos de gran densidad, sobre todo para hongos y levaduras. Como los cultivos se someten a varios procesos (Filtración, lavado, secado) se pueden causar pérdidas importantes de biomasa y errores de cuantificación.
El método decuenta directa en cámara tiene la ventaja de ser muy rápido y económico, aunque no se pueden distinguir las células viables y no viables. Se puede calcular el número de microorganismos en una muestra a partir del volumen de la cámara y de las diluciones de la muestra que sean necesarias. Sin embargo, tiene el inconveniente de que la observación y cuantificación se dificultan en células muypequeñas o en poblaciones de baja densidad debido al pequeño volumen de muestra que se utiliza.

Cámara Neubauer para el recuento de levaduras

La cámara de Nuebauer es una cámara de contaje adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un diamanteuna cuadrícula de dimensiones conocidas. La cámara está cubierta con un cubrecámaras que se adhiere por simple tensión superficial.

Luego se introduce el líquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una dilución previa con un diluyente, por capilaridad entre la cámara y el cubrecámara; puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultáneamente. Para contar las...