Tecnica del PAS practica

Hemos realizado esta práctica con una muestra de hígado. Primero, hemos cortado y
metido en cassetes el trozo de hígado y seleccionamos en el Histolab el programa
largo. Después de 2 díasrealizamos la inclusión en parafina y cortamos con 5 µ.
Desparafinamos durante 5 minutos y guardamos los cristales 5 días, tras los cuales
volvemos a desparafinar durante 30 min. A continuación,hidratamos, empezando por
2 baños de xilol de 5 min. cada uno, 30 min. en al alcohol de 96º, 20 min. en el alcohol
de 90º y en el resto hasta el alcohol de 70º, durante 5 minutos en cada uno,terminando con un pase de 5 min. por agua. Lo guardamos en una cámara húmeda
durante 2 días.
Como la estructura que va a teñir el PAS, no es muy común, vamos a oxidar con ácido
periódico al 5% ydespués lavamos en agua destilada durante 5 minutos. Añadimos el
colorante de Schiff (que se ha preparado días anteriores y antes de usarlo lo hemos
filtrado 3 veces) y lo dejamos durante 20minutos tras los cuales lavamos con agua
templada del grifo 5 minutos. Después, filtramos la Hematoxilina de Mayer (30 ml) y la
dejamos durante 13 minutos, después de los cuales lavamos con aguadestilada
durante 15 min. para eliminar los residuos del agua de grifo.
Luego, deshidratamos (80º,90º,96º, alcohol absoluto y dos baños de xilol), miramos al
microscopio por si es necesario seguirdeshidratando y montamos con DPX.

VARIACIONES:
 El Schiff lo dejamos 20 min., en vez de 15
 La Hematoxilina de Mayer la dejamos 13 min. en vez de 15
 Hemos hidratado más de lo normalRESULTADOS:
En general, la tinción ha salido bien y vemos:
Sustancias PAS+: glucógeno de color rosa, la membrana basal que podemos verla con
el objetivo de inmersión enfocando y desenfocandoConductos biliares y células musculares lisas alrededor
Núcleos: de azul muy oscuro (debido a la hematoxilina)

TincionPAS. X40

TincionPAS. X40

TincionPAS. X5

TincionPAS. Obj inmersion...