Tecnica Espectofotometria

) APLICACIONES DE LA TÉCNICA
Una de las aplicaciones prácticas de mayor interés de la espectrofotometría de
absorción UV-Visible es la del análisis cuantitativo, basada en la aplicación de la ecuación de
Lambert-Beer
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA
Fototubo
Filtro
Cubeta
Rendija de salida
Lámpara
Lente
Rendija de entrada
Objetivo
Prisma
(mono )
(multi )
Pantalla
Espectrofotometríapágina 5
Se trata de analizar la composición de una disolución que contiene una mezcla del indicador
Azul de Bromotimol en su forma molecular HA (ácida) y disociada A- (básica), las cuales
presentan absorción en la región VISIBLE del espectro. Las propiedades
espectrofotométricas del Azul de Bromotimol en ambas formas son diferentes, lo que
permite su cuantificación en disoluciones en las queaparecen mezcladas. Para ello habrá
que registrar los espectros de absorción de las dos formas (ácida y básica) y obtener las
correspondientes rectas de calibrado a dos longitudes de onda seleccionadas.
MATERIALES Y REACTIVOS
‰ Espectrofotómetro UV-Visible y 6 cubetas de plástico.
‰ Matraces aforados de 10 mL
‰ Vasos de precipitados de 100 mL
‰ Pipetas graduadas de 10 mL y de 5 mL.
‰ 4 Frascosde almacenamiento.
‰ Disolución de Azul de Bromotimol en medio ácido (HA) de concentración 5.10-5 M
‰ Disolución de Azul de Bromotimol en medio básico (A-) de concentración 5.10-5 M
‰ Disolución diluyente ácida: HCl 10-2M.
‰ Disolución diluyente básica: NaOH 10-2 M.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a) Preparación de disoluciones de la forma ácida del Azul de Bromotimol:
Tomando como base unadisolución de partida, facilitada por el profesor, de Azul de
Bromotimol 5.00.10-5 M en medio ácido (HCl), prepárense por dilución las siguientes
disoluciones:
{ Disolución A: En un matraz de 10 mL pipetear 8 mL de disolución de partida y
enrasar con diluyente ácido (HCl).
{ Disolución B: En un matraz de 10 mL pipetear 6 mL de disolución de partida y
enrasar con diluyente ácido.
{ Disolución C:En un matraz de 10 mL pipetear 4 mL de disolución de partida y
enrasar con diluyente ácido.
{ Disolución D: En un matraz de 10 mL pipetear 2 mL de disolución de partida y
enrasar con diluyente ácido.
Nota: El pKa del azul de bromotimol es 7.30, al encontrarse en medio ácido
no hay duda de que el indicador se encuentra totalmente bajo su forma
ácida:
HA l A- +H+
(pKa=7.30)
b) Preparaciónde disoluciones de la forma básica del Azul de Bromotimol:
Tomando ahora como base una disolución de partida, facilitada por el profesor, de
Azul de Bromotimol 5.00.10-5 M en medio básico (NaOH 10-2M), prepárense por
dilución las mismas disoluciones que en el apartado anterior pero ahora enrasando
con diluyente básico (NaOH).
Espectrofotometría página 6
Nota: Como el pKa del indicador es7.30 no hay duda de que éste se encuentra
totalmente bajo su forma básica en NaOH 10-2 M .
c) Obtención de los espectros de la forma ácida y básica del indicador:
Para ello vamos a utilizar las disoluciones “A” respectivas preparadas anteriormente.
En cada caso, llenaremos una cubeta con la referencia adecuada y otra con la
muestra a medir. A continuación, iremos midiendo el valor de laabsorbancia de la
muestra a distintas longitudes de onda entre 400 y 680 nm, haciendo las medidas a
intervalos de 10 nm. Es importante tener en cuenta que, cada vez que se modifique
el valor de la longitud de onda, hay que ajustar de nuevo el cero de absorbancia con
la referencia.
Finalmente, se representan los datos en papel milimetrado, de manera que
figure la absorbancia “A” en ordenadas frente alongitud de onda “l” en abcisas:
d) Obtención de las rectas de calibrado para las formas ácida y básica del Azul
de Bromotimol:
A la vista de los espectros de absorción de la forma ácida y básica del
indicador, se apreciará un máximo para la forma básica en torno a 620 nm y un
máximo para la forma ácida alrededor de 440 nm. Elegidos estos valores de longitud
de onda como los mas idóneos,...