Tecnica histologia y microscopica

Técnica histológica y microscopía

Las técnicas utilizadas por los histólogos son diversas en extremo. La mayor parte de los contenidos de un curso de histología se puede formular en los términos de la microscopia óptica, que los estudiantes manejan en las practicas de laboratorio, pero la interpretación mas detallada de la microanatomía se fundamenta en la microscopia electrónica (ME),tanto con el microscopio electrónico de transmisión (MET) como con el microscopio electrónico de barrido (MEB). La ME, dado su aumento mas útil y su resolución mayor, suele ser el ultimo paso en la adquisición de datos al que se recurre entre muchas técnicas auxiliares de la biología celular y molecular. Estas técnicas auxiliares incluyen:

• Histoquímica y citoquímica.
• Inmunocitoquímicay técnicas de hibridación.
• Radioautografía.
• Cultivo de tejidos y órganos.
• Separación de células y orgánulos por centrifugación diferencial.
• Microscopios y técnicas microscópicas especializadas.

Preparación del tejido
Tinción con hematoxilina y eosina de muestras fijadas en formalina
El corte de rutina teñido con hematoxilina y eosina es la muestra que masfrecuentemente se estudia
La caja de preparados que se entrega a cada estudiante para que examine bajo el microscopio óptico contiene principalmente especímenes fijados en formalina, incluidos en parafina y coloreados con hematoxilina y eosina (H-E). Casi todas las microfotografías ópticas que se presentan en las secciones del atlas de este libro son de preparados de estas mismas cajas. Además delas microfotografías utilizadas para ilustrar tejidos y órganos en las clases teóricas de histología y en conferencias se obtienen de estos preparados. A veces se usan otras técnicas para demostrar componentes específicos de las células y los tejidos; varias de estas técnicas se describen mas adelante.
El primer paso en la preparación de una muestra de tejido u órgano es la fijación para conservarla estructura
La fijación, en general obtenida mediante el empleo de sustancias químicas individuales o mezclas de estas sustancias, conserva la estructura del tejido en forma permanente para permitir el tratamiento ulterior. Las muestras tienen que sumergirse en el fijador inmediatamente después de extraerse del organismo. La fijación se utiliza para:
• Abolir el metabolismo celular.• Impedir la degradación enzimática de las células y tejidos por autólisis (autodigestión).
• Destruir los microorganismos patógenos como las bacterias, los hongos o los virus.
• Endurecer el tejido como consecuencia de la formación de enlaces cruzados o la desnaturalización de las moléculas proteicas.

Histoquímica y citoquímica
Los procedimientos químicos específicos puedenproveer información detallada acerca de la función de las células y los componentes extracelulares de los tejidos.
Los métodos histoquímicos y citoquímicos pueden tener su fundamento en la unión específica de un colorante, el uso de anticuerpos marcados con un colorante fluorescente dirigidos contra un componente celular en particular o la actividad enzimática inherente de un elementoconstitutivo de las células. Además, muchas macromoléculas presentes en las células pueden detectarse por medio de la radioautografía , en la cual precursores moleculares marcados radiactivamente se incorporan a las células y los tejidos antes de la fijación. Muchos de estos procedimientos pueden usarse en preparados tanto para la microscopia óptica como para la microscopia común.

Histoquímica enzimáticaLas técnicas histoquímicas también se utilizan para identificar y localizar enzimas en células y tejidos.

Para localizar, enzimas en los cortes histológicos debe tenerse especial cuidado durante la fijación para que se preserve la actividad enzimática. La fijación aldehídica débil suele ser el método preferido.
En estos procedimientos se detecta el producto de la reacción de la...