Tecnica histologica

TÉCNICA HISTOLÓGICA PARA MICROSCOPÍA ÓPTICA
Otro pilar importante en la asignatura es el descrito a continuación ya que a lo largo del texto se observarán imágenes de microanatomía de los órganos, por lo que es necesario conocer el método que se utiliza para que esos tejidos lleguen a nuestras manos.
La técnica histológica está conformada por varios pasos, con el objetivo de mantener el tejidomuerto mediante reacciones químicas y por tanto en lo posible el aspecto de las estructuras como en el organismo vivo, lo cuales se describen a continuación:
1. Obtención de la muestra mediante una biopsia, que es la extracción de tejido de un organismo vivo, se utiliza una cuchilla afilada evitando dañar el tejido como la piel, también se realizan en órganos internos como el hígado o riñón,otras por medio de una endoscopia o durante una cirugía llamado biopsia por congelación la cual le permite al cirujano tener la certeza de que extirpó toda la masa patológica y además tener un diagnóstico por parte del patólogo para determinar su siguiente acto. Una muestra sanguínea o citología exfoliativa.
Biopsia toma de la muestra a partir de un individuo vivo, puede ser incisional (parcial)o excisional (total).
Necropsia toma de la muestra a partir de un individuo muerto.

2. Fijación en formol al 10%, las células mueren por la detención de sus procesos celulares, se evita que el tejido entre en autolisis (degradación enzimática), sirve como agente antimicrobiano y endurece el tejido por la formación de enlaces cruzados con residuos de lisina, estabilizando las proteínas locual permite mantener la estructura de la célula. Dado que los alcoholes que se usan en preparados de rutina y diluyen lípidos o carbohidratos se han empleado otros fijadores como son el glutaraldehído, metales pesados como permanganato y el tetróxido de osmio los cuales forman enlaces transversales, se utilizan en la microscopia electrónica para la conservación de las membranas celulares.3. Deshidratación de la muestra con soluciones de etanol en concentraciones crecientes hasta llegar al 100%.

4. Aclarado con xileno o tolueno que son líquidos miscibles en etanol y parafina, de igual forma en soluciones con concentraciones crecientes hasta llegar al 100%, y decrecientes de alcohol hasta llegar a 0%.

5. Inclusión en parafina la cual es cera insoluble en agua por lo queson necesarios los dos pasos anteriores, se disuelve el xileno o touleno y penetra así en el tejido, se forman bloques con suficiente dureza que permiten el corte de la muestra llamados taco.

6. Corte de la muestra con un grosor de 5-10 m en el micrótomo
1mm=1 000 micrómetros m
1 m=1 000 nanómetros nm
7. Desparafinado mediante un tratamiento con xileno o tolueno y posteriormentesu rehidratación con soluciones desde 100% hasta 0 % de alcohol antes de ser teñidos, ya que los colorantes están en soluciones acuosas.

8. Tinción mediante colorantes acuosos que pintan las estructuras de la célula que perduraron hasta este punto, ya que con el uso de los solventes se pierden macromoléculas como el glucógeno, proteoglucanos, glucosaminoglucanos, lípidos neutros, ARN detransferencia, proteínas pequeñas, metabolitos, glucosa, sodio, cloro.

En preparados de rutina se emplea hematoxilina y eosina que tiñe los componentes nucleares de azul violáceo y el citoplasma de un tono rosado.

9. Montaje de los cortes en el portaobjetos con una gota de medio de montaje transparente para su perfecta adhesión. Se coloca un cubreobjeto para proteger el preparado.
Losfijadores son sustancias que desnaturalizan y precipitan macromoléculas celulares. Las sustancias con este efecto pueden ocasionar coagulación o precipitación de materiales que no tenían una estructura en la célula viva, lo que conduce a la formación de un artefacto (un error en el proceso de preparación), también se vinculan con la metodología, el equipo utilizado.
HISTOQUÍMICA
Hematoxilina y...