Tecnicas Analiticas
Páginas: 15 (3590 palabras)
Publicado: 8 de febrero de 2013
PRÁCTICA 1.
PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD DE PROTEÍNAS.
Los principales factores que afectan a la solubilidad de una proteína están relacionados con sus estructuras secundaria y terciaria, y son: pH, temperatura, fuerza iónica y constante dieléctrica (() del medio.
En esta práctica estudiaremos la influencia de estos cuatros factores sobre la solubilidad de seroalbúmina,así como los fenómenos de precipitación por formación de sales con reactivos acídicos y sales de metales pesados.
Las interacciones proteína-proteína fomentan la precipitación, mientras que las interacciones proteína-solvente ayudan a la solubilidad.
El punto isoeléctrico (pH en el que la carga neta es 0) de la albúmina se encuentra entre los valores 4,5 y 5,5 de pH. Cuandoel pH se encuentra por debajo de este punto, la proteína se encuentra cargada positivamente, mientras que cuando el pH se encuentra por encima de éste, la proteína tiene carga negativa.
[pic]
CÁLCULOS DE DILUCIONES:
➢ Preparación de 2ml de HCl 0,5N a partir de HCl 2N.
[pic]
➢ Preparación de 2ml de NaOH 0,2N a partir de NaOH 2N.
[pic]TABLA DE RESULTADOS:
|TUBO |TRATAMIENTO |FACTOR |PRECIPITACIÓN |REDISOLUCIÓN |
|1 |pH=2, 100ºC |pH y Tª |- |-------- |
|2 |100ºC ||+ |Medio BÁSICO |
|3 |pH=7, 100ºC | |- |-------- |
|4 |EtOH/acetona, 0ºC |( |+ |Medio NEUTRO |
|5 |EtOH/acetona, 100ºC| |+ |Medio BÁSICO |
|6 |SO4(NH4)2 al 33%, 0ªC |Fuerza iónica |- |-------- |
|7 |SO4(NH4)2 al 50%, 0ªC | |- |--------|
|8 |SO4(NH4)2 al 100%, 0ªC | |+ |Medio NEUTRO |
|9 |TCA 20% |ácidos y bases |+ |Medio BÁSICO |
| | |fuertes || |
|10 |NO3H 20% | |+ |Medio BÁSICO |
|11 |NaOH 20% | |- |-------- |
|12 |Acetato de Plomo 0,05M|metales pesados |- |-------- |
|13 |Acetato de Plomo 0,05M, pH=7 | |+ |Medio ÁCIDO |
|14 |Acetato sódico 0,05M, pH≤7 | |- |-------- |
EXPLICACIÓN DELOS RESULTADOS:
TUBO 1:
El pH de este tubo (pH=2) es menor que el del punto isoeléctrico (pH=4,5-5,5), por lo que las proteínas se encuentran cargadas positivamente, lo que hace que, aunque los 100ºC de temperatura las desnaturalizan favoreciendo el choque entre moléculas, se repelan, impidiendo las interacciones proteína-proteína.
Predominan las interacciones proteína-solvente,...
PROPIEDADES DE SOLUBILIDAD DE PROTEÍNAS.
Los principales factores que afectan a la solubilidad de una proteína están relacionados con sus estructuras secundaria y terciaria, y son: pH, temperatura, fuerza iónica y constante dieléctrica (() del medio.
En esta práctica estudiaremos la influencia de estos cuatros factores sobre la solubilidad de seroalbúmina,así como los fenómenos de precipitación por formación de sales con reactivos acídicos y sales de metales pesados.
Las interacciones proteína-proteína fomentan la precipitación, mientras que las interacciones proteína-solvente ayudan a la solubilidad.
El punto isoeléctrico (pH en el que la carga neta es 0) de la albúmina se encuentra entre los valores 4,5 y 5,5 de pH. Cuandoel pH se encuentra por debajo de este punto, la proteína se encuentra cargada positivamente, mientras que cuando el pH se encuentra por encima de éste, la proteína tiene carga negativa.
[pic]
CÁLCULOS DE DILUCIONES:
➢ Preparación de 2ml de HCl 0,5N a partir de HCl 2N.
[pic]
➢ Preparación de 2ml de NaOH 0,2N a partir de NaOH 2N.
[pic]TABLA DE RESULTADOS:
|TUBO |TRATAMIENTO |FACTOR |PRECIPITACIÓN |REDISOLUCIÓN |
|1 |pH=2, 100ºC |pH y Tª |- |-------- |
|2 |100ºC ||+ |Medio BÁSICO |
|3 |pH=7, 100ºC | |- |-------- |
|4 |EtOH/acetona, 0ºC |( |+ |Medio NEUTRO |
|5 |EtOH/acetona, 100ºC| |+ |Medio BÁSICO |
|6 |SO4(NH4)2 al 33%, 0ªC |Fuerza iónica |- |-------- |
|7 |SO4(NH4)2 al 50%, 0ªC | |- |--------|
|8 |SO4(NH4)2 al 100%, 0ªC | |+ |Medio NEUTRO |
|9 |TCA 20% |ácidos y bases |+ |Medio BÁSICO |
| | |fuertes || |
|10 |NO3H 20% | |+ |Medio BÁSICO |
|11 |NaOH 20% | |- |-------- |
|12 |Acetato de Plomo 0,05M|metales pesados |- |-------- |
|13 |Acetato de Plomo 0,05M, pH=7 | |+ |Medio ÁCIDO |
|14 |Acetato sódico 0,05M, pH≤7 | |- |-------- |
EXPLICACIÓN DELOS RESULTADOS:
TUBO 1:
El pH de este tubo (pH=2) es menor que el del punto isoeléctrico (pH=4,5-5,5), por lo que las proteínas se encuentran cargadas positivamente, lo que hace que, aunque los 100ºC de temperatura las desnaturalizan favoreciendo el choque entre moléculas, se repelan, impidiendo las interacciones proteína-proteína.
Predominan las interacciones proteína-solvente,...
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