Tecnicas de biotecnologia
13.1 Purificación y detección de ácidos nucleicos Técnicas de biotecnología utilizando ácidos nucleicos
Capítulo 13 Biochemistry 6th Edition Campbell and Farrell
Técnicas deseparación
Electroforesis Auto radiografía: se usa para visualizar la imagen que ha sido expuesta a oligonucleotidos marcados. Luminiscencia: depende de la emisión de luz. Fluorescencia: emisión adiferentes largos de onda.
Métodos de detección
13.2 Uso de enzimas de restricción
Son enzimas que hidrolizan el enlace fosfodiester en puntos específicos.
Nucleasas
Endonucleasas de restricción
Producen pedazos de DNA que son manejables.
Endonucleasas de restricción
Las secuencias reconocidas leen lo mismo en ambas direcciones.
Palindromes
“Sticky ends”: secuencias pequeñas en los extremos del DNA; proveen puntos donde otras moléculas de DNA se enlazan.
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2/9/2009
13.3 Clonación
DNA recombinado (Chimeric DNA):moléculas de DNA que contienen segmentos enlazados covalentemente de otras fuentes de DNA.
Utiliza los “sticky ends” Se producen copias idénticas de DNA.
Clones: población idéntica deorganismos, células, virus o moléculas de DNA.
Clonación de un virus
Producción de DNA recombinado
Cada virus infecta una célula y se reproduce, igual que su progenie. Finalmente aparece unaplaca que indica el área donde las células fueron matadas. Representa la progenie clonada.
Clonación de las células
Ambos DNA se tratan con la misma enzima, se mezclan y se permite que se unan los“sticky ends”. Se produce DNA recombinado. Se incorpora en un virus y son sembrados. Se identifican los segmentos clonados: foreign DNA, insert, geneX o YFG (your favorite gene)
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2/9/2009Plásmido
Experimentos exitosos
Transformación: DNA es incorporado en el huésped.
Las bacterias incorporan el plásmido son transformadas.
Aumento en temperatura (heat-shock) o por...
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