tecnicas de blot

Ministerio de Educación
Colegio Abel Bravo
Curso de Biología



Trabajo de investigación colaborativo
Técnicas de identificación de ADN recombinante



Tema:
Southern Blot
Northern Blot
Western Blot



Presentado por:
Jean Carlos Arrocha #1
Lachany Hurtado #12
Jacqueline Sánchez #29


Nivel: XIIºE



Profesor:
Anell E. Pelliere S.



Fecha deEntrega:
Lunes, 29 de junio del 2015.






Introducción

La técnica de blotting se basa en la transferencia de bandas de ácidos nucleicos o proteínas desde un gel hacia una membrana de nitrocelulosa. Esto permite identificar la presencia de una banda por electroforesis. La electroforesis permite la separación ya sea de proteína o ácidos nucleicos en un gel. Cuando se trata de proteínas se utiliza ungel de poliacrilamida mientras que para los ácidos nucleicos uno de agarosa. Cuando lo que se intenta identificar es DNA, se denomina Southern Blot, para esto se utilizan moléculas de DNA marcadas con radioactividad y que tengan una secuencia conocida y se identifican así las bandas de gel que contienen secuencias complementarias a la muestra. Si se trata de RNA, se denomina Northern Blot, paraesto se utilizan moléculas de RNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida y se identifican también las bandas de gel que contengan las secuencias complementarias a la muestra. La técnica de Northern blot es muy útil en el análisis de moléculas de ARN. Este análisis es similar al Southern blot para el ARN. En general, esta técnica implica el aislamiento de las moléculas de ARN apartir de fuentes de interés y la separación del ARN aislado por agarosa o electroforesis en gel de poliacrilamida, el ARN separado en el gel se transfiere entonces a una matriz sólida como el papel de filtro a través del proceso de transferencia. El análisis de Northern blot permite la detección y cuantificación de especies de ARN específicas de un tipo de célula particular. Detalladamente leestaremos desarrollando cada punto sobre estas tres técnicas de las que se menciona.





ÍNDICE

Introducción
Diferentes técnica de investigación de ADN recombinante
1. Técnica de Southern Blot
1.1 Pasos de Southern Blot
1.1.1. Extracción del ADN
1.1.2. Digestión del ADN con una endonucleasa de restricción
1.1.3. Electroforesis en gel de agarosa
1.1.4. Preparación de un ensayo de Southern
1.1.5.Hibridación con sonda radioactiva
1.1.6. Detención de los RFLPsmediante autoradiografia
1.1.7. Reensayar el resultado del Southern con sondas adicionales.
1.2. Diagnóstico de enfermedades.
2. Técnica de Northern Blot.
2.1. Procedimiento
2.1.1. Geles
2.1.2. Sondas
2.2. Aplicaciones
2.3. Ventajas y desventajas
2.4. Northern Blot inverso
3. Técnica de Western Blot
3.1. Pasos del WesternBlot
3.1.1. Preparación de la muestra
3.1.2. Electroforesis en gel
3.1.3. Transferencia
3.1.3.1. Tranferencia al vacio
3.1.3.2. Electrotransferencia
3.1.4. Bloqueo
3.1.5. Detención
3.1.5.1. Mtodo en dos pasos
3.1.5.1.1. Anticuerpo primario
3.1.5.1.2. Anticuerpo secundario
3.1.5.1.3. Radioactividad
3.1.5.1.4. Anticuerpo unido a una enzima
3.1.5.1.5. Marcaje fluorescente
3.1.5.1.6. Sistemaavidiva/estreptavidina
3.1.5.1.7. Detección con oro.
3.1.5.2. Método de un paso
3.1.6. Análisis
3.1.6.1. Detección colorimetría
3.1.6.2. Detección quimoluminiscente
3.1.6.3. Detección fluorescente
3.1.7. Exploraciones secundarias
3.2. Aplicaciones
3.2.1. Investigación
3.2.2. Diagnóstico.
Anexos
Conclusión
Bibliografía









Técnica de Southern Blot

Southern blot, hibridación Southern o,simplemente, Southern es un método de biología molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja de este ácido nucleico. Permite identificar regiones específicas de ADN que han sido fragmentadas por una enzima de restricción. Para ello, emplea la técnica de electroforesis en gel de agarosa con el fin de separar los fragmentos de ADN de acuerdo a su...