TECNICAS DE COMPROBACION DE ACTIVIDAD TERAPEUTICA DE LAS PLANTAS

TECNICAS DE COMPROBACION DE ACTIVIDAD TERAPEUTICA DE LAS PLANTAS
MEDICINALES
A la luz de los modernos avances en botánica, fitoquímica, farmacología,
farmacocinética, farmacodinamia y toxicología, el conocimiento tradicional y popular
sobre las propiedades medicinales de las plantas deberá ser constatado y validado para
garantizar una terapia adecuada, eficaz y con la menor incidencia deocasionar riesgos
para el paciente.
A nivel popular basta muchas veces con extraer los principios activos de la manera más
sencilla, como puede ser por medio de una infusión o decocción. En cambio, para
analizar las propiedades medicinales de una droga vegetal, en muchos casos se recurrirá
a métodos de extracción más complejos, que permitan obtener métodos reproducibles,
con cuantificación deprincipios activos en lo posible. Entre los métodos extractivos más
empleados para investigación contamos con:
1. Extracción para tamizaje: Se realiza por medio de una maceración a temperatura
ambiente con 1 a 3 disolventes de diferentes polaridades. Por lo general se emplean:
diclorometano o hexano, éter o etanol, y agua.
2. Aislamiento y elucidación estructural: Para aislar e identificarmoléculas con
actividad terapéutica se recurre a técnicas de filtración, extracción selectiva, partición,
intercambio iónico, absorción, filtración en gel, cromatografía y cristalización.
ENSAYOS PARA ANTIMICROBIANOS
Con ella se puede conocer la capacidad que tiene una droga vegetal para comprobar una
eventual actividad antimicrobiana. Se emplean métodos de difusión en placas o discos
con agar oen tubos con caldo para cultivo. El método consiste en impregnar discos de
papel secante de 6 mm de diámetro y 0,6 mm de grosor con 50 μl del extracto vegetal.
Se aplican los discos en el cultivo y se incuba a 35ºC durante 24 horas. Al retirar
debemos ver (en caso de actividad) halos de inhibición que se miden en mm. Si el halo
dio mayor a 9 mm. el resultado es positivo. Si el halo dio entre6-9 mm. la actividad se
considera intermedia o moderada. Si el halo fue inferior a 6 mm. se considera negativo
(sin actividad).
Con este método se puede determinar la CIM (Concentración Inhibitoria Mínima) que
requiere la droga vegetal para matar al microorganismo. La CIM es la concentración más
baja que requiere el extracto ensayado para que haya crecimiento visible. Los
microorganismos másfrecuentemente utilizados son:
Bacterias: Bacillus subtilis, Corynebacterium diphteriae, Escherichia coli, Haemophilus
influenzae, Klebsiella pneumoniae, Micrococcus luteus, Mycobacterium tuberculosis,
Neisseria gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, S. paratyphi, S.
typhimurium, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Staphylococcus aureus,
Streptococcus pyogens,Streptococcus pneumoniae, Vibrio cholerae.
Levaduras y Hongos: Aspergillus flavus, Candida albicans, Cryptococcus neoformans,
Epidermophyton floccosum, Microsporum spp., Neurospora crassa, Saccharomyces
cerevisae, Trichophytum mentagrophytes.
Protozoarios y Parásitos: Ascaris lumbricoides, Entamoeba hystolitica, Plasmodium
berghei, Plasmodium falciparum, Plasmodium spp., Trichomonas vaginalis,Trypanosoma
cruzi.
Virus: Herpes simplex virus tipo I y II, virus de la estomatitis vesicular, Coxsakie virus,
poliovirus, citomegalovirus, etc.
En algunos casos hay que relacionar los resultados con el estudio etnobotánico. Por
ejemplo, durante un screening de actividad antiherpética, el extracto acuoso de la
especie Gamochaeta simplicicaulis presentó sólo un 14% de inhibición de crecimientofrente al virus HSV-1 (herpes simplex virus tipo 1) en cultivos de células VERO. Este
resultado parcial hubiera desalentado estudios posteriores. Sin embargo los estudios
etnobotánicos daban cuenta de un amplio empleo de esa planta como antiviral.
Cambiando el método, se observó que si el extracto era administrado al mismo tiempo
que el inóculo del virus en las células de cultivo, la inhibición...