Tecnicas de extraccion de dna miller

PRACTICA # 1 OBTENCION Y PURIFICACION DEL DNA CROMOSOMAL INTRODUCCIÓN. LOS ACIDOS NUCLEICOS. Es muy probable que, en la actualidad, todo mundo haya escuchado hablar de los ácidos nucleicos, en particular del ADN, simplemente por los descubrimientos recientes y por las grandes innovaciones tecnológicas en la investigación del ADN, los cuales no dejan de aparecer casi a diario en los grandesperiódicos. Las iniciales ADN significan ácido desoxirribonucleico. Se encuentra en todas las células. Al ADN muchas veces se le llama la molécula central de la vida, ya que contienen las unidades de la herencia, que se llaman genes son un código químico que especifica el tipo de proteína que un organismo puede producir y estas proteínas incluyen a las enzimas que regulan la mayor parte de la actividadcelular. ESTRUCTURA DE LOS ACIDOS NUCLEICOS. Cada molécula de ADN está formada por dos polímeros extremadamente largos sostenidos entre sí por enlaces de hidrógeno y enrollados en lo que se conoce como doble hélice. Cada uno de los dos polímeros está formado por numerosas subunidades llamadas nucleótidos, enlazadas covalentemente formando las cadenas. Cada nucleótido está compuesto por tres partes:un compuesto de fósforo llamado fosfato, un azúcar de 5 carbonos simples y una base nitrogenada. Existen cuatro bases nitrogenadas en el ADN, por lo tanto hay cuatro diferentes nucleótidos. Su ordenamiento lineal específico dentro del polímero constituye el código químico (código genético). En otras palabras, los genes son básicamente un ordenamiento de nucleótidos. En nuestro ADN que simplementedetermina como serán nuestras proteínas. TÉCNICAS DE EXTRACCIÓN DEL DNA El primer paso en la purificación del DNA consiste en homogeneizar las células y distar los núcleos de los cuales se extrae el DNA. El medio de extracción de ordinario contiene un detergente, como el SDS, que sirve para lisar los núcleos y liberar el DNA, hecho que aumenta notablemente la viscosidad de la solución. Eldetergente inhibe también cualquier actividad nucleasa en la preparación. El objetivo de los pasos de purificación es separar el DNA de materiales contaminantes, como RNA y proteínas. La desproteinización se logra en general agitando la mezcla con un volumen de fenol. El fenol (o alternativamente cloroformo) es un desnaturalizador activo de proteínas que suprime la solubilidad de las proteínas en lapreparación y las precipita. Puesto que el fenol y la solución salina amortiguadora no se mezclan, solo se requiere centrifugar la suspensión para separar las bases, permaneciendo el DNA (y el RNA) en la solución dentro de la fase acuosa de arriba y la proteína presente como un precipitado concentrado en la interfase. La fase acuosa se retira del tubo y se somete a ciclos repetidos de agitación confenol y centrifugación hasta agotar toda la proteína de la solución. Añadiendo etanol frío. El etanol frío forma una capa arriba de la solución acuosa del DNA, el cual, se enrolla sobre una varilla de vidrio conforme sale de la solución. En la interfase el RNA sale de la solución salina. En contraste, el RNA sale de la solución como precipitados que se asienta en el fondo del vaso. Luego 1

deeste primer paso de purificación, se disuelve el DNA y se trata con ribonucleasa mediante tratamiento con una proteasa. Enseguida se quita la proteasa por desproteinización con fenol y se vuelve a precipitar el DNA. 2 SEPARACIÓN DEL DNA MEDIANTE ELECTROFORESIS EN GEL. La electroforesis en gel se utiliza más ampliamente en la separación de ácidos nucleicos de diferente peso molecular. Las moléculasRNA o DNA pequeñas, de unos pocos cientos de nucleótidos o menos, por lo general se separan mediante electroforesis en gel de poliacrilamina. Las moléculas de mayor tamaño tienen problemas para desplazarse a través de la cerrada trama de la poliacrilamina y en general se fraccionan en gel de agarosa que tiene mayor porosidad. La agarosa es un polisacárido extraído de algas marinas. El gel con...