Tecnicas de inclusion y tincion

INSTUTITO TECNOLOGICO DE BOCA DEL RIO.

BOTANICA I

TECNICAS DE INCLUSIÓN Y TINCIÓN, HISTOQUÍMICA Y LOS DIFERENTES TIPOS DE MICRÓTOMOS.

CATEDRATICO
Briol. Citlalli Galicia García

ALUNMO
Gómez Jiménez Ulises

Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas ocupadas en los estudios de microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica. La Técnica Histológica abarcavarios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes como se conocen, montados bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo microscopia óptica o electrónica.
Los procedimientos de la Técnica Histológica se resumen en las etapas siguientes:

Para empezar con la técnica histológica se debe obtener una muestra del tejido a estudiary existen 2 formas:
* Necropsia: Examen u obtención de tejido de un organismo muerto.
* Biopsia:(del griego bios= vida y oasis = visión) Examen u obtención de tejido de un organismo vivo. Puede ser inscisional, excisional, por sacabocado, por punción y absorción, por raspado, por trepanación.
FIJACIÓN:
Este proceso se refiere al tratamiento del tejido con sustancias químicas que tienenvarias finalidades:
1. Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado in vivo.
2. Aumentar la dureza del tejido para facilitar la preparación de finas películas de éste.
3. Destruir bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
4. Interrumpir los procesos celulares dinámicos que ocurren a la muerte de la célula.
Esto se logra alinactivar ciertas enzimas celulares que de otra manera iniciarían la Autolisis y llevarían a la DEGENERACIÓN POST MORTEM.
La fijación mantiene las estructuras al estimular la formación de enlaces cruzados entre las proteínas.
Los agentes más usados para Microscopia de Luz son:
Formaldehido al 5%, Formol al 10% o Formalina (Solución de Formaldehido especial)
* Puede usarse con amortiguadores ocon otros fijadores.
* Reacciona con los grupos aminos de las proteínas, formando enlaces transversales y conservando las estructuras de la célula.
* Es el más usado es el Formol al 10%.
Glutaraldehído al 2.5%, Tetróxido de Osmio, Líquido de Helly y Fijador de Bouin
* Funcionan formando enlaces transversales en las proteínas y manteniendo las estructuras de la célula.
* El fijadorde Bouin es una solución que contiene 75 ml de solución acuosa saturada de ácido pícrico, 25 ml de formol y 5 ml de ácido acético glacial.
* El líquido de Helly es una solución con 2.5 g de bicromato de potasio, 5 g de cloruro de mercurio, 100 ml de agua y 5 ml de formol.
Cloruro de Mercurio y Ácido Picrico
* Precipitan las proteínas.
Para Microscopia Electrónica se usan:Glutaraldehído al 2.5%, Paraformaldehído, Tetróxido de Osmio y Permanganato de Potasio
* Permiten conservar detalles estructurales finos, ya que otros fijadores como el formaldehido, son muy enérgicos en su acción con las proteínas.
* Actúan como colorantes electro densos, permitiendo observar al tejido con el haz de electrones.
* Una solución de Glutaraldehído al 2.5% en un tampón a pH 7.4, evitala violenta desnaturalización de las proteínas guardando detalles finos de la célula. Es el más usado en Microscopia Electrónica.
Regla de Oro para la Fijación
* La mejor fijación es cuando ha pasado el menor tiempo entre la muerte del tejido y la fijación.
* Tamaño de la Muestra
* El tamaño de la muestra debe de ser de 2-3 cm. variando el estudio para lo cual se va a utilizar.DESHIDRATACIÓN
Después que la muestra ha sido fijada se elimina el fijador y se deshidrata.
Debido a que una gran parte del tejido está constituida por agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas de menor a mayor de agente deshidratante, por ejemplo, Alcohol Etílico o Acetona. Iniciando con alcohol al 50 %, luego con una solución de 60%, 70%, 80%, 90%, 96% y alcanzando de manera...