Tecnicas de inoculacion de un biorreactor

Universidad Nacional Federico Villarreal
Laboratorio de Microbiología I –Técnica para inocular un tubo de Caldo de Cultivo
I.- OBJETIVOS
Aprender a cultivar en medio liquido(Caldo
Nutritivo)
Aprender a sembrar en tubos con agar inclinado,
de adentro hacia fuera.
Reconocer y recordarse que el flameado es de
suma importancia.
II.- GENERALIDADES:
INOCULACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:
Enmicrobiología se entiende por "siembra" la operación que consiste en depositar un
germen asépticamente en un medio de cultivo.
Toda siembra debe adaptarse a los siguientes principios generales:
1. Practicarla en medios de cultivo favorable y previamente esterilizado.
2. Emplear instrumentos asépticos.
3. No contaminar ni destruir el inóculo,
4. Depositarla asépticamente en los medios elegidos.
5.Esterilizar os instrumentos empleados antes y después de cada operación.
El instrumento corrientemente empleado en las siembras son los siguientes:
1. El asa: Es un alambre de cromo níquel, tiene un diámetro de 0,3 a 1 mm. de diámetro y está sujeto a un mango de vidrio o de metal. El hilo puede terminar recto (aguja), en anillo (asa) o aplastado (espátula).
Los medios de cultivo, como ya se hadicho, pueden ser sólidos o líquidos, y estar
contenidos en tubos, placas o frascos.
La técnica general de las siembras variará según el estado físico del material a
sembrar y del medio de cultivo.
Ing. Vanessa García Díaz
Ingeniería Agroindustrial

Universidad Nacional Federico Villarreal
Laboratorio de Microbiología I –Técnica para inocular un tubo de Caldo de Cultivo
METODOS DE CULTIVODE USO RUTINARIO:
Al inocular debe trabajarse siempre dentro del radio de un mechero Bunsen (30 cm.), o, en el ambiente dentro de una campana de flujo laminar, ya que, la corriente ascendente de aire que va por la llama, o la corriente de aire del flujo laminar arrastra el polvo y otras partículas con el aire hacia arriba, o hacia afuera; impidiendo la contaminación del medio de cultivo.
El asadebe ser flameada adecuadamente y enfriada antes de tocar el inóculo, o el
medio de cultivo.
1. Siembra en placas:
Con el asa ya esterilizada, se toma una gota de líquido o de una emulsión del producto patológico y se deposita en un costado del agar de una placa Petri, se estría a partir de ese punto pasando suavemente el asa en zig-zag por la superficie del agar sin rasparlo, rotar la placa en1/3 y repetir el procedimiento 2 a 3 veces. A menudo se reciben tórulas para cultivo y con ellas se practica la primera de las estrías, procediendo después a diseminar con el asa o pipeta en la forma descrita.
2. Siembra en tubos de agar tendido:
El cuello del tubo debe ser flameado antes y después de ser sembrado. Con el asa previamente esterilizada a la llama, se toma una pequeña cantidad dela muestra y se lleva al fondo del tubo, luego se estría suavemente la superficie del medio en forma ondulante.
Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo, debe dejarse suelto el tapón de goma
para evitar que los gases expulsen el tapón.
3. Siembra por picadura:
El inóculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidadoen hacer el mismo trayecto de entrada que de salida. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que los gases expulsen el tapón.
4. Siembra en superficie y picadura:
El inóculo es introducido con el asa recta o pipeta pasteur hasta el fondo del medio con un solo movimiento yteniendo cuidado en hacer el mismo trayecto de entrada que de salida, se retira hacia la superficie inclinada del agar haciendo suavemente una estría ondulada. Debe flamearse la boca del tubo antes y después de la siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa de cultivo debe soltarse el tapón de goma para evitar que los gases expulsen el tapón.
Ing. Vanessa García Díaz
Ingeniería Agroindustrial...