Tecnicas De Laboratorio Clínico

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ASPARTATO AMINOTRANSFERASA TGO (AST)

CONSERVAR A 2-8 ºC

MÉTODO
Cinético UV.

INTRODUCCIÓN
La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del hígado, las células del músculo esquelético y en menor cantidad en otros tejidos.
Aunque un nivel alto de AST en suero no es específico de seguimiento, juntocon otras enzimas como ALT y ALP. También se utiliza en el control post-infarto, en pacientes con desordenes del músculo esquelético, y en otras afecciones.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La aspartato amino transferasa (AST) inicialmente llamada transaminasa glutamato oxaloacética (TGO) cataliza latransferencia reversible de un grupo amino del aspartato al α-cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de malato deshidrogenada (MDH) y NADH:

AST
Aspartato + α-cetoglutarato Glutamato+ Oxalacetato

MDH
Oxalacetato + NADH + H+ Malato + NAD+

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determinada fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de AST en la muestra ensayada.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DEL KIT
Mantener a una temperatura 2 – 8 ºC ybien cerrados
Protegerlos de la luz y se evita su contaminación
No usar tabletas fragmentadas
No usar reactivos fuera de la fecha de caducidad indicada.
No usar reactivos con presencia de partículas y/o turbidez
No reportar si la absorbancia del blanco es 340 < 1,00.

LECTURA
Espectrofotometría a 340 nm.
Baño termoestable a 37 ºC

MUESTRAS
Sueros o plasmas. Estabilidad de la muestrahasta 7 días a 2-8 ºC.

PROCEDIMIENTO
• Longitud de onda a 340 nm
• Cubeta 1cm paso de luz
• Temperatura 37 ºC
• Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua o aire
• Pipetear en una cubeta
RT(mL) 1,0
MUESTRA (µL) 100

• Mezcla e incubar 1 minuto.
• Leer absorbancia (A) inicial de la muestra poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
•Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (∆A/min).

CÁLCULOS
∆A/min x 1750 = U/L de AST

VALORES DE REFERENCIA
SEXO TEMP. 37 ºC
HOMBRES HASTA 38 U/L
MUJERES HASTA 31 U/L

























DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE ALANINA AMINOTRANSFERASA TGP (ALT)

CONSERVAR A 2-8 ºC

MÉTODO
Cinético UV.

INTRODUCCIÓN
La ALT es una enzimaintracelular, que se encuentra principalmente en las células del hígado y el riñón.
Su mejor aplicación es en el diagnóstico de las enfermedades del hígado.
Se observan niveles elevados en enfermedades hepáticas como la hepatitis, enfermedades de los múscul90s y traumatismos.
Cuando se emplean en conjunto con la AST ayuda en el diagnóstico de infartos al miocardio, ya que el valor de ALT semantienen dentro de los límites normales y aumenta en los niveles de SAT.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La alanita aminotransferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutámico pirúvica (TGP) cataliza la transferencia irreversible de un grupo amino de la alanina al α-cetoglutarato con formaciónde glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido al lactato en presencia de lactato deshidrogenada (LDH) y NADH:
ALT
Alanina + α-cetoglutarato Glutamato + Piruvato

LDH
Piruvato + NADH + H+...