Tecnicas De Laboratorio

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO
OBJETIVO
Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.
FUNDAMENTO
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número deglóbulos rojos y de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo (hemograma).
Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunaspersonas sienten un dolor moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo ypresentando un color rojo intenso.
Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura se usa una escala estandarizada.

MATERIAL
  Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm  Pipetas Pasteur
  Equipo para venopuncion (Tubo lila)
  Tubos capilares azules o rojos
  Plastilina
  Encendedor o cerillos
  Centrifuga
  Microcentrifuga 

SUSTANCIAS:
  Alcohol al 70%
  Sangre venosa

PROCEDIMIENTO
Para macrohematocrito:
1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lilacon EDTA

2.    Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.

3.    Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar la evaporación
4.    Centrifugar a 3000 rpm durante30 minutos

5.    Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar resultados
Para Microhematocrito:
1.    Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.

2.    Ocluir (tapar) elextremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina o sellando con fuego
3.    Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma

4.    Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm
5.    Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total deplasma y eritrocitos o por medio de la regleta.
6.    Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea hroizontal correspondiente al cero
7.    Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al nivel del tope del plasma.  El tubo debe de encontrarsecompletamente en posición vertical.

8.    La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen de estos.

OBSERVACIONES
Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de leucocitos y una delgada de color gris, que son...