Tecnicas Histologicas

Técnicas histológicas.
Dos de las técnicas básicas que permiten el estudio del embrión temprano de aves son: la observación de embriones in toto (enteros) o de cortes histológicos de embriones en diferentes estadios del desarrollo. La primera aproximación nos permite visualizar la organización general del embrión, mientras que los cortes histológicos hacen posible estudiar la organizacióninterna en diferentes niveles y tiempos de desarrollo del embrión.
En este práctico intentaremos brindar una visión general sobre la organización de uno de los modelos de estudio del desarrollo en aves. El pollo ofrece varias ventajas como modelo, entre ellas es de fácil obtención y se puede disponer de embriones en diferentes estadios del desarrollo simplemente incubándolos a una temperatura dada porel período de tiempo correcto (ver gráfica I). Sin embargo es de destacar que las primeras etapas del desarrollo (segmentación) son difíciles de observar ya que transcurren dentro del oviducto, y también es difícil obtener embriones en gastrulación en forma reproducible ya que hay pequeñas diferencias en el progreso de los embriones a través de estas etapas. Por consiguiente se trabajará conembriones incubados durante tiempos de 30-38hrs, a 37ºC en un ambiente húmedo. Los embriones se disecarán a diferentes tiempos y se procesarán para microscopía óptica reservando algunos para obtener preparados in toto.

EXTRACCIÓN DE EMBRIONES
Los huevos se sacan de la incubadora y se los sostiene sin girarlos entre las manos, de forma tal que queden con el extremo romo hacia arriba. Se comienza ladisección rompiendo levemente la cáscara golpeando con la parte de atrás de una pinza en la parte superior del huevo, de manera tal que luego se pueda insertar una pinza y retirar de a poco la cáscara.
Sobre la yema del huevo se observará el disco en el cual se desarrolla el embrión. Para retirar este disco se pueden seguir dos procedimientos:

1. Se retira la mayor parte posible de clara paraque el disco embrionario no se desplace (se va a ir derramando a medida que se saque más cáscara). Luego con una tijera se recorta las membranas extraembrionarias en tres o cuatro cortes por alrededor del disco embrionario. De esta forma el embrión quedará libre, podrá ser levantado con una cuchara y colocado en PBS. Luego, bajo lupa, se puede separar el embrión y colocarlo directamente enfijador.
2. Se vuelca el contenido del huevo en una placa de Petri intentando que no se rompa la yema y que el embrión quede expuesto. Se prepara un anillo de papel de filtro cuyo orificio interno sea apenas mayor que el embrión. Utilizando pinzas se apoya este anillo sobre el embrión, de forma tal que éste se observe centrado en el orificio y quede rodeado por el papel de filtro.

Presionandolevemente se logra que el papel se adhiera a las paredes del saco vitelino. A continuación se procede a cortar dicha membrana, cuidando especialmente el realizar esto todo alrededor del papel de filtro. Utilizando una pinza adecuada se levanta la corona de papel de filtro con el embrión adherido (el aro de papel de filtro oficia de bastidor). Éste se coloca en una placa de Petri con PBS para lavar losrestos de vitelo que puedan quedar.
Luego de esto podemos observar al embrión bajo lupa, el cual deberá mantenerse en PBS para evitar su desecación. A continuación se procede a colocarlo en fijador.

TECNICA HISTOLÓGICA DE RUTINA
Una técnica histológica comprende el conjunto de procedimientos a los que se somete una muestra para su análisis microscópico.
La elaboración de preparacioneshistológicas pasibles de ser observadas tanto por microscopía fotónica como electrónica, obedece a una serie de principios generales que son comunes para ambas.
En este repartido nos referiremos fundamentalmente a la técnica histológica de rutina, empleada en la realización de preparados para su observación al microscopio óptico.
Para obtener una preparación histológica es necesario procesar el...