tecnicas instrumentales

Técnicas instrumentales II
TEMA 1: El microscopio electrónico.
1. Comparativa.
Para estudiar la estructura interna de los procariotas es esencial el uso del ME. En este microscopio se
utilizan electrones en vez de rayos de luz, y como lentes funcionan unos electroimanes. Cuando los
electrones pasan a través de la preparación algunos son difractados creando entonces una imagen que se
hacevisible en una pantalla sensible a los electrones. La longitud de onda (λ) de la radiación de los
electrones es mucho más pequeña que la de la luz visible y, como el poder resolutivo de un microscopio
es inversamente proporcional a la λ (longitud de onda) utilizada, la resolución obtenida con el ME es
mucho mayor que la conseguida con el MO.
Características
Resolución ojo humano
Resolución MOResolución ME

Resolución
0,1 mm
0,2 μm
0,5 nm

Magnitud
10
-6
10
-9
10

Con el MO ordinario las estructuras mínimas observables tienen 0,2 µm, con el ME pueden verse fácilmente
objetos de 0,001 µm por lo que es posible ver sustancias de tamaño molecular. Sin embargo sólo pueden
examinarse objetos muy delgados: una bacteria es demasiado gruesa para observarla directamente:Preparar muestras para el ME precisan de cortes ultrafinos.
1.1 Fundamente microscopio electrónico:
Dentro del ME tenemos el de barrido y el de transmisión. La ventaja de los ME’s frente a los ópticos esté en
que la λ del haz de luz es aproximadamente 1/200, lo cual aumenta la resolución. Las muestras se preparan
sobre la misma base que la del MO pero requieren métodos más finos. Este microscopio sebasa en los
siguientes principios:
1. Fuente que emite electrones (cátodo).
2. Ánodo, hacia el cual son atraídos los electrones.
3. Cámara de vacío entre el cátodo y el ánodo debido a que las trayectorias de los e- son muy cortas y los
átomos del aire chocarían con los mismos sin producir imagen.
4. Diferencia de potencial entre el cátodo y el ánodo (voltaje de aceleración entre 20.000 y200.000 voltios
a los e-) creando así el haz.
5. El haz pasa por electroimanes de misma función que las lentes de vidrio de un MO.
6. El condensador forma el haz y modifica el diámetro del haz que incide en el plano del espécimen.
7. El haz que atraviesa la muestra se coloca en un foco y se aumenta por un objetivo o aun más con una o
más lentes proyectoras. La imagen final se visualiza sobreuna rejilla cubierta de carbono: Partes de la
muestra que han sido atravesadas por los electrones aparecen brillantes, las partes que
absorbieron o esparcieron los electrones por su densidad inherente o debido al agregado de metales
pesados durante la preparación del espécimen aparecen oscuras.
2. Preparación de muestras.
La muestra debe ser incluida en rejillas de cobre metálicas con 400casillas (3 mm Ø). Encima de las
mismas se colocan fibras de celulosa o de carbono de unos 10-20 nm de grueso (normalmente de
carbono ya que es un elemento muy ligero y que no dispersa los e- para evitar así que las muestras se
rompan y disminuir la relación señal-ruido. Éste también posee resistencia mecánica). Además estos films
deben estar compuestos de elementos de bajo número atómico ya que ladispersión de los e- es el nº
atómico al cuadrado.
2.1 Obtención de los filamentos de carbono:
Ésta se realiza mediante evaporadores (campanas de vidrio) que generan un alto vacío el interior de las
cuales hayamos terminales eléctricos y una plataforma (rejilla de cobre) sobre la que se puede depositar la
muestra. Se colocan electrodos de carbono para fabricar los filamentos. Para trasladarel hilo hasta la rejilla
se hace con un cristalizador lleno de agua donde se obliga a que el soporte donde está el hilo contacte con
el agua por lo que el hilo sale del soporte y queda flotando en agua.
3. Mejora del contraste.
La dispersión de los e- en las muestras es proporcional al cuadrado del nº atómico y es debida a los e- de
los orbitales de los átomos de la muestra. Generalmente la...