tecnicas instrumwntales

APLICACIÓ DE LIPASES D’ORIGEN FÚNGIC EN LA HIDRÒLISIS
D’OLIS VEGETALS PER A L’OBTENCIÓ D’ÀCIDS I
MONOGLICÈRIDS D’INTERÈS ALIMENRARI – ANÀLISI DEL
RESULUTAT DE LA REACCIÓ PER CROMATOGRAFIA DE CAPA
FINA (CCF)
Revelat de la CCF:

Questions:
- Quants productes s’han format de la hidròlisi de l’oli? Pots identificar-los? Si algun producte no
el pots identificar, podries fer una suposicióde quin producte podria haver-se format? Queda oli
sense reaccionar? Justifica les respostes.
Si comparem el patró d’oli amb la reacció, veiem que s’han format unes taques al mig de la
capa fina i a baix de tot, i que la taca que hi ha al primer quart de la capa fina començant per
baix s’ha intensificat. La taca que apareix al mig deu correspondre als àcids grassos generats
durant la reacció,ja que la taca té una forma de bala similar a la del patró d’àcid oleic; l’altra
taca, que es veu intensificada en relació al patró d’oli ( i al blanc de miceli) no podem assegurar
què és perquè no tenim cap patró que ens dongui una taca així, però segurament és tractarà de
mono i diglicèrids, que s’han format per la hidròlisi parcial dels triglicèrids. La taca que es veu
lleugerament a baixde tot deu correspondre al glicerol generat en la reacció, ja que és un
compost polar i és el que hauria d’estar més atret per la fase estacionaria de gel de sílice (que
també és polar), i per tant queda molt retingut i a baix de tot en la separació. També veiem que
queda una bona part dels triglicèrids (component majoritari de l’oli) sense reaccionar, i que
correspon a la taca gran a la partsuperior de la capa fina.

Pg 1

David Moreno i Israel Santana

Pràctiques de Tècniques Instrumentals Bàsiques

- Calcula el Rf de cada un dels diferents reactius i productes.
5,3
= 0,815
6,5
4
Rf 2 =
= 0, 615
6,5
3, 4
Rf 3 =
= 0,523
6,5
3,1
Rf 4 =
= 0, 477
6,5
1,3
Rf 5 =
= 0, 2
6,5
0, 2
Rf 6 =
= 0, 031
6,5
Rf1 =

- Es produeix hidròlisi sense presencia debiocatalitzador?
Sí, ja que la reacció és termodinàmicament espontània i el catalitzador el que fa és accelerar la
reacció. Per això detectem una lleugera presència de mono i diglicèrids en el blanc del miceli i
en el patró d’oli, que no detectaríem si els triglicèrids no reaccionessin amb res.
- Comenta els productes que han eluït, si n’hi ha, del blanc sense oli d’oliva.
Hi ha mono i diglicèridsaixí com àcids grassos, que son restes de l’oli en que teníem creixent el
miceli. El miceli estava vivint en oli per a que produís les lipases que ens interessen, però a
l’hora de fer la cromatografia ens apareixen les restes de l’oli on vivia el fong, és a dir que les
taques no corresponen a cap dels productes de la nostra reacció (de fet en aquest blanc no havia
oli per a que reaccionés).
-Per què es posa àcid acètic en la fase mòbil?
Per modular la polaritat del eluent i la separació cromatogràfica es pugui realitzar
correctament.

Pg 2

David Moreno i Israel Santana

Pràctiques de Tècniques Instrumentals Bàsiques

DETERMINACIÓ D’ÀCID PIRÚVIC EN CEBES PER
ESPECTOSCÒPIA D’UV-VIS
Questions:
- Quina concentració d’àcid pirúvic conté la ceba?
Per determinar laconcentració en ceba hem de preparar un seguit de patrons d’àcid pirúvic i
agafar una mostra suc de ceba per analitzar-los amb l’espectrofotòmetre UV-Vis. Amb els
patrons podem construir una recta patró per regressió de mínims quadrats, i amb l’equació de
la recta calcular la concentració de piruvat en la ceba per interpolació. Els resultats de
l’espectroscòpia van ser els següents:
Mostra (mM)
1
24
6
ceba

Absorbància
0,082
0,081
0,182
0,193
0,345
0,506
0,517
0,155
-

A partir d’aquests resultats podem construir la recta patró i deduir la concentració en piruvat de
la ceba en el vial analitzat per interpolació:
Absorbància = 0,085*concentració + 0,0047
2
R = 0,9976

Absorbància vs concentració
0,6

absorbància

0,5
patró
mostra

0,4
0,3
0,2
0,1
0
0...