TECNICAS LABORATORIO

5. TÉCNICAS DE LABORATORIO

Criterios de Identificación en el Laboratorio de Microorganismos

Bacterias
Hongos
Parásitos
Virus

Criterios de Identificación:
1. Características de crecimiento en medios de cultivo: color de las colonias, forma de las colonias, tiempo y temperatura de crecimiento (Bacterias: 24 – 48 h)
2. Morfología Microscópica: Cocos, bacilos, cocobacilos, vibrios(forma de coma), espiroquetas, Estafilococos (agrupados en racimos), Estreptococos (agrupados en filas).
Filamentosos
a) Cultivos en medios especiales:
- Agar Sabouraud.
- Se aprecian las características macroscópicas de la colonia:
- Pigmentación

b) Microscopía óptica:
- Identificación de estructuras características:
* Tipo de hifas (septadas, no septadas (cenocíticas)
*Coloración delas hifas hialinas, dematiaceas (coloreadas)
* Forma y tamaño de conidias (estructuras de reproducción asexual)

- Se hacen montajes con azul de lactofenol.
-Se hacen montajes Frescos en KOH o Tinta china.

Hongos levaduriformes

a) Cultivos en medios especiales: Agar Sabouraud. Se aprecian las características macroscópicas de la colonia:
- Tipo de colonia. Cremosa, brillante, color,bordes, si es o no elevada.

b) Microscopía óptica:
-Se hacen montajes Frescos en KOH o Tinta china.
- Se observan levaduras redondas que pueden o no estar en gemación.

c) Coloración de Gram: en levaduriformes para ver Blastoconidias y pseudomicelios

d) Pruebas bioquímicas de utilización de hidratos de carbono (azucares)
- Características morfológicas macroscópicas y microscópicas:
*Formas de huevos
* Formas de larvas
* Formas de quistes
- Montajes al microscópico con Lugol parasitológico
- Montajes frescos en gota de agua
- Solo se observan en Microscopia electrónica
- Para obtener suficiente cantidad del virus se realizan cultivos celulares.




Cocos: Forma
Esférica




Diplococos:
Cocos en pareja




Estafilococos:
Cocos en racimosEstreptococos
Cocos en filas




Tetracocos:
Agrupados en 4




Sarcina: cocos en grupos de 8








Bacilos


Vibrio

Espiroquetas (Espirilos)




3. Características de tinción:
- Gram Positivos o Gram negativos
-Acido alcohol resistentes (Mycobacterium sp)
4. Movilidad: es o no móvil
5. Esporas: presentes o ausentes
6. Características Bioquímicas:Cocos Gramnegativos
Bacilos Gramnegativos




- Prueba de Oxidasa
- Pruebas de utilización de azúcares: Glucosa, Lactosa, Sacarosa, Maltosa
- Utilización de Citrato como única fuente de carbono: Medio: Citrato de Simmons
- Fermentación de azucares: Medios: TSI (Triple sugar iron) y agar Hierro de Kiegler
- Producción de Indol: derivado del triptófano. Medio: SIM
-Fermentación ácido mixta: Producen ácidos fuertes a partir de glucosa y mantienen el medio a un pH de 4,4. Medio: Rojo de Metilo (RM)
- Vía alterna para metabolismo de Ácido pirúvico: Convierten acetoina en diacetilo sin producir ácidos fuertes. Medio Voges Proskauer (VP)
- Producción de Sulfuro de Hidrógeno (H2S): Medio SIM (Sulfito – Indol – Motilidad), TSI
- Motilidad: Medio SIM
- Producción deUreasa: producen esta enzima que degrada la úrea liberando amoníaco y cambia el pH del medio. Medio: Urea
- Descarboxilación de Lisina, ornitina, Arginina: Medio: LIA




Cocos
Grampositivos




- Prueba de Catalasa (Con H2O2)
- Hemólisis en Agar sangre: Alpha (α) Beta (β) o gamma (γ)
- Crecimiento en diferentes concentraciones de Na Cl




MEDIOS DE CULTIVO

TIPOS
DIFERENCIALESSELECTIVOS
NO SELECTIVOS


Nos permiten distinguir entre varios géneros y especies de microorganismos. Se les incorpora sustancias utilizadas por microorganismos específicos y se añaden indicadores que permiten evidenciar el uso de la misma. Ejemplo: Se añade lactosa, sustancia fermentada por algunas Enterobacterias, y un indicador de cambio de pH: rojo neutro que se torno rojo a un pH...