Tecnicas Moleculares De Identificacion Bacteriana En Microbiologia

TÉCNICAS MOLECULARES DE IDENTIFICACIÓN BACTERIANA Y BIOINFORMÁTICA
Técnicas Moleculares de Identificación bacteriana
En la actualidad las técnicas moleculares para la identificación de microorganismos están teniendo un auge muy importante debido a: 1.- Especificidad (pueden detectar solo la molécula o microorganismo de interés), 2.- Sensibilidad (son capaces de detectar la presencia de un solomicroorganismo), 3.-Rapidez (se puede identificar un microorganismo en menos de 24 horas) y 4.- Pueden ser automatizadas (permiten tener un diagnóstico en un menor tiempo y reducir los costos). El uso de técnicas moleculares ha permitido identificar nuevos microorganismos, los cuales no había sido posible su cultivo e identificación por técnicas tradicionales. Además permiten estudiar laspoblaciones microbianas  sin hacer aislamientos, por lo tanto, se evitan los sesgos que pueden surgir con el cultivo de microorganismos. Así mismo estas técnicas permiten la detección de microorganismos altamente patógenos, los cuales pueden ser identificados muertos evitando así los riesgos de infección del analista. Las técnicas moleculares han demostraron ser muy útiles en situaciones clínicas dondelos métodos convencionales son muy insensitivos, muy lenta o muy complicados para ser usados a gran escala. Otra aplicación importante es en el monitoreo del surgimiento de mutaciones  en el genoma, por ejemplo, la selección de variantes resistentes  durante la terapia antiviral/antibiótica.
Se han propuesto una gran variedad de técnicas moleculares para la detección de  microorganismos. Una delas técnicas moleculares más sencillas para identificar bacterias consiste en determinar el porcentaje de guaninas y citosina presente en su  ADN.  
La mayoría de las técnicas moleculares se basan en la hibridación de los ácidos nucleicos o bien en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).
a).- Técnicas basadas en hibridación de ADN
Estas técnicas  se desarrollaron a partir delconocimiento de que dos cadenas sencillas de ácido nucleico que tengan secuencias complementarias se pueden unir o hibridar para formar una cadena doble. Las cadenas sencillas pueden ser  de ADN o ARN, o bien una de ADN y otra de ARN. Dentro de las técnicas de hibridación mas utilizadas esta los fragmentos de restricción de longitud polimórfica (RFLP’s).   
RFLPs. Esta técnica está basada en hibridaciónde ADN. Consiste en extraer ADN de un cultivo puro de un microorganismo o bien de una muestra infectada y digerir el ADN con enzimas  de restricción, posteriormente estos fragmentos de ADN es separado  en un gel de agarosa utilizando electroforesis. Esta metodología es muy específica. Sin embargo, no es muy rápida ni muy sensible, además de que se requiere utilizar radioactividad.
Transferenciapor aplastado (squash blot). En esta técnica la muestra a analizar se aplasta contra un soporte sólido originando una huella, la muestra se fija utilizando alcohol o exponiéndola a UV.  Se hibridiza con la sonda específica para el microorganismo en cuestión. Tiene la ventaja de ser una técnica rápida, que puede ser utilizada en campo o fuera de laboratorio. Sin embargo es una técnica sucia, locual a veces no permite distinguir una hibridación  de ácidos nucleicos, con lo cual las probabilidades de obtener falsos negativos se incrementan. Otra de las técnicas son: Transferencia de punto (dot blot) similar a squash blot  y Northern blot similar a RFLPs  sin embargo lo que se separa es ARN y se hibridiza con sondas de ADN presenta ventajas y desventajas similares a  RFLPs.
ARN de cadenadoble. Esta técnica se utiliza principalmente para detectar células infectadas con un virus que tenga como material genético ARN (retrovirus). Dado que el ARN en una célula se encuentra como cadena sencilla, la presencia de ARN de cadena doble implica la replicación del virus dentro de la célula.  Esta es una técnica relativamente sencilla, dado que incluye pocas etapas. Sin embargo, presenta la...