TECNICAS MOLECULARES EN ENFERMEDADES INFECCIOSAS

INTRODUCCIÓN

La tipificación puede proporcionar información sobre la distribución de tipos microbianos en poblaciones humanas y animales, lo cual puede ser aplicado en programas de vigilancia a nivel local, regional, nacional o global. De especial interés pueden ser el monitoreo de marcadores asociados con la patogenicidad, inmunogenicidad o resistencia a medicamentos, como se demuestra porejemplo en la vigilancia del cólera con la emergencia de una nueva cepa epidémica en Asia.
Estas técnicas también pueden ser usadas en estudios clínicos para la delineación de patrones de colonización y para la identificación de fuentes de transmisión de microorganismos infecciosos, lo cual puede contribuir a un entendimiento de la epidemiología y patogénesis.
La bilogía molecular ha contribuidono solamente al mejor entendimiento de las de las enfermedades infecciosas, sino que también ha proporcionado herramientas moleculares para el diagnóstico, las técnicas de biología molecular son usadas cada vez con mayor frecuencia. Ellas permiten no sólo caracterizar mejor al agente causal de la enfermedad, sino también el comprender mejor los mecanismos patológicos a nivel molecular, siendo Asíposible mediante ella, detectar genomas de patógenos en muestras de biopsia o fluidos de pacientes. Debido a la elevada afinidad de las cadenas complementarias del ADN, Adicionalmente, la caracterización molecular del ADN permite nutrir con datos específicos los estudios epidemiológicos aunque es posible detectar muy pocos organismos en una muestra a ser analizada.TÉCNICAS MOLECULARES

1. Hibridación con sondas de ADN: consiste en la unión de una sonda de ADN con secuencias complementarias, utilizando una molécula blanco fijada en una matriz.

2. LaHuella Digital de Plasmidos (PF): El número y tamaño de los plasmidos presentes es utilizado como base para la identificación de cepas.

3. Análisis de Endonucleasas de Restricción de ADN de Plasmidos (REAP): esta técnica es utilizada principalmente como una alternativa para los aislamientos de estafilococos que contienen frecuentemente plasmidos múltiples.

4. Análisis del Polimorfismo deLargos Fragmentos Amplificados (AFLP): está basada en la detección de fragmentos de restricción genomica por amplificación con reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y puede ser utilizada para ADNs de cualquier origen o complejidad.

5. Técnica de electroforesis en gel de campos pulsantes (PFGE): fue descrita como una herramienta para examinar el ADN cromosómico de organismos eucariotas.6. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR): es una técnica que se utiliza para amplificar (crear copias múltiples de) el ADN, sin utilizar un organismo vivo, tal como la E. coli o una levadura.

7. Reacción en Cadena de la Polimerasa con Primers Arbitrarios (AP-PCR): ha sido sucesivamente aplicada para la delineación de cepas genotípicas y análisis de poblaciones genéticas.

8. Análisisde la secuencia de los nucleótidos: es el medio más preciso y sensitivo de indexar el polimorfismo del ADN localizado para la tipificación de cepas bacterianas.



La detección de moléculas de patógenos y moléculas de respuesta de los hospederos ante la infección es el principio básico de las pruebas diagnósticas moleculares. Los nuevos avances en biología molecular y el desarrollo detecnología robótica y secuenciación genómica y proteica han permitido el desarrollo de nuevas pruebas diagnósticas altamente específicas y de gran rendimiento. La genómica y proteómica contribuyen a la identificación de biomarcadores y la biotecnología aporta métodos para producir reactivos de alta pureza. La identificación de genes codificantes de antígenos específicos, su clonación y producción...