Tecnicas Para Control Microbiologico

TECNICAS UTILES PARA ELCONTROL MICROBIOLÓGICO DE LOS ALIMENTOS
 
 
3.2.1 CULTIVO DE MICROORGANISMOS
 
3.2.1.1 Fundamento
El cultivo de microorganismos tiene por objeto su estudio e identificación, que se efectúa mediante las características que presentan las bacterias. Dichas características dependen del comportamiento delas poblaciones, más que de los organismos individualmente, de ahí quesean importantes los materiales y métodos para conseguir el desarrollo y la multiplicación.
3.2.1.1.1 Cultivo en medios líquidos
 
Material:
* Caldo nutritivo en tubos, estéril.
* Alimento problema o dilución de éste.
* Asa de siembra.
* Mechero.
* Estufa de 37° C.
Método:
* Sembrar en tubo con caldo nutritivo un asa del alimento problema o de la dilución.
* Llevara la estufa a 37° C.
* Observar a las 48 horas el tipo de crecimiento.
 
3.2.1.1.2 Cultivo en medios sólidos
Material:
* Tubos de ensayo con Agar triptosa (inclinado).
* Agar triptosa estéril.
* Placas de Petri estériles.
* Asa de siembra.
* Pipetas de 1 mL, estériles.
* Estufa a 37° C.
Material:
* Tubos de ensayo con Agar triptosa (inclinado).
* Agartriptosa estéril.
* Placas de Petri estériles.
* Asa de siembra.
* Pipetas de 1 mL, estériles.
* Estufa a 37° C.
 
Tipos de siembra
Siembra en tubo con Agar inclinado:
Sembrar sobre la superficie del Agar inclinado un asa del alimento problema o de la dilución. Incubar los tubos  a 37 °C. Observar a las 48 horas la forma de crecimiento.
 Siembra en placa en estría:
Poner 15mL de Agar triptosa, en una placa de Petri estéril, dejar solidificar. Sembrar en estría un asa de alimento problema o de la dilución. Incubar las placas, en posición invertida, a 37°C durante 48 horas. Observar el tamaño, forma y aspecto de las (plana, convexa, umbilicada...etc.; brillante, seca..etc.).
Siembra en placa por homogeneización en masa:
Poner 1, 0.5 y 0.1 mL de alimento (o dilución)problema en placas de Petri estériles. Añadir 10-15 mL de ágar nutritivo a cada una de las placas, atemperado a 45°C. Realizar movimientos circulares y devaivén para que el inóculo se distribuya uniformemente. Dejar solidificar. Incubar las placas invertidas a 37°C durante 48 horas. Contar las placas que tienen entre 30-300 colonias.
Siembra en placa por superficie:
Poner 15 ml de Agar Triptosa en unaplaca de Petri estéril. DEjar solidificar. ADicionar 0.1 ml de la muestra o de las diluciones del alimento y distribuir de forma homogénea por la superficie con ayuda deun asa de siembra estéril
 

Siembra en placa por superficie
 
 
3.2.2 RECUENTO DE GÉRMENES POR DILUCIÓN EN TUBO
 
 
DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE GERMENES EN UN ALIMENTO
El recuento por diluciónproporciona una idea del número de organismos vivos presentes en una muestra que son capaces de multiplicarse en un medio líquido determinado. Se elige un medio líquido capaz de mantener el crecimiento de las bacterias que se están estudiando.Este método se utiliza cuando se sospeche un número muy bajo de gérmenes.
 
3.2.2.1 Material
* Tres series (o más) de cinco tubos (cada serie) con elmedio de cultivo adecuado, según microorganismo.
* Botes de dilución con 90 mL de agua de peptona al 0.1% y pH= 6.8-7, estéril.
* Material diverso según el tipo de alimento a analizar.
 
3.2.2.2 Método
* Hacer diluciones del alimento al 1/10. 1/100. 1/1000 o más si fuera necesario. (ver protocolo de diluciones).
* Poner 1 mL de la última dilución en cada uno de los tubos de la última serie.* Hacer lo mismo con las demás diluciones de manera ascendente .
* Incubar el tiempo necesario y a la temperatura adecuada según el que queramos investigar.
* Pasado el tiempo de incubación hacer la lectura y anotar el número de tubos positivos de cada serie.
* Consultar las tablas de probabilidad con el número de tubos positivos, Estos resultados se expresarán como número...