tecnicas ultraestructurales

CLASE I DE TECNICAS ULTRAESTRUCTURALES I
Las células son pequeñas. Miden entre 10 y 40 micras de diámetro. Además son incoloras y traslúcidas.
MICROSCOPIO ELECTRONICO
Permite analizar los constituyentes subcelulares de las células normales y / o patológicas

Resuelve la estructura fina de la célula

El poder de resolución ( R ) del Microscopio Electrónico es 0,002 nanometros (Menorque el del microscopio óptico).

Esto es debido a que utiliza electrones, en vez de fotones.
Los electrones poseen una longitud de onda menor que la de la luz visible
La longitud de onda disminuye a medida que aumenta la velocidad de los electrones
Los electrones pueden ser acelerados, usando voltaje de aceleración equivalentes a 100.000 voltios
“ A MENOR LONGITUD DE ONDA MENOR PODER DERESOLUCION”.
Unidades de medidas
1 milímetro (mm) representa una milésima de metro (1/1000)
1 micra (µm) representa una millonésima de metro 1/1.000.000
1 nanómetro (nm) representa una milmillonésima de metro
Unidades utilizadas en Microscopía Electrónica
1 nanómetro (nm) representa una milésima parte de 1 micra
1 angström (Å) equivale a 0,1 nanómetro (nm)
Tamaño biológico yDiversidad celular
0,1 nm es el tamaño de un átomo
1 nm es el tamaño de un aminoácido
5-10 nm es el tamaño de una proteína
Los virus tienen entre 10 y 100 nm
Las mitocondrias pueden observarse con el Microscopio óptico pero solo como pequeños puntos. Ellas se ven bien con el Microscopio electrónico.
PARTES DEL MICROSCOPIO ELECTRONICO:
1. 2 fuentes de poder (electrones)
2. Lente condensadora3. Lentes objetivas (electromagnéticas)
4. Lente proyectora
5. Imagen final que se ven en una Pantalla de Visualización (placa fotográfica)

Nota: entre las lente condensadora y la objetiva (electromagnética) va la Platina, donde se coloca la muestra (espécimen)
MICROSCOPIO ELECTRONICIO DE TRANSMISION
Podemos ubicar 2 unidades básicas:
1. Unidad de Alta tensión: responsable de generar elalto voltasge para obtener un rayo electrónico que tenga de longitud de onda adecuado. Puede superar los 100000 voltios
2. Sistema de vacio: esta anexo y lejos del microscopio, porque las vibraciones que producen las bombas pueden crear movimientos en el microscopio. El sistema de vacio es necesario para que los electrones se desplacen desde el lugar donde se forman al lugar donde vamos a obtenerla imagen. Es la columna del microscopio, que esta forrada por una tela metálica.
Los elementos de la columna, desde la parte superior hacia abajo, son:
Cátodo (aquí se originan los electrones. Tiene un pequeño filamento de tungsteno. Cuando le llega la corriente de 100.000 voltios alcanta temperatura elevada y, desprende electrones)
Anodo (se coloca después del catodo para generar unadiferencia de potencial entre cátodo y ánodo y provocar el voltaje de aceleración de los electrones)
Lentes del condensador (electromagnético): condensan los haces de lectrones para que pasen por un cánula de 1 mm.
Platina donde va el especimen
Lente del objetivo (aquí se forma la imagen)
Lente de proyección (proyecta en forma inversa la imagen)
Pantalla de visualización
Permite observar imágenesbidimensionales por transiluminacion
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO
Permite observar imágenes tridimensionales y objetos completos.
Tiene menor resolución que el Microscopio electrónico de transmisión.
PARA LA MICROSCOPIA ELECTRONICA LOS CROTES TIENEN QUE SER FIJADOS Y SECCIONADOS
* Fijación
-mantiene la integridad de las células al evitar la su autolisis o destrucción
-permeabilizalas células a las sustancias contrastantes
-El material debe ser fijado inmediatamente
-Se utilizan 2 fijadores: glutaraldehido al 2 % (prefijación) y tetroxido de osmio (posfijación)
- El glutaraldehido sstablece puentes cruzados entre las diversas moléculas mediante Uniones covalentes al desplazar los átomos H y es bueno para fijar las proteínas.
-El tetroxido de osmio se reduce por...