Tecnico En Industria De Proces

Pseudomonas agar P.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la detección y la diferenciación de especies de Pseudomonas spp. En base a la producción de piocianina. Conocido también como medio King A.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de gelatina aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la producción de pigmentos, las sales demagnesio y potasio estimulan la producción de piocianina y piorrubina e inhiben la producción de fluoresceína.
Fórmula (en gramos por litro) | Instrucciones |
  Peptona de gelatina | 20.0 | Suspender 46.4 g del polvo en un litro de agua destilada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar con agitación constante para homogeneizar el producto. Llevar a ebullición para que se disuelva por completo.Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121 ºC. |
  Sulfato de potasio | 10.0 | |
  Cloruro de magnesio | 1.4 | |
  Agar | 15.0 | |
pH final: 7.0 ± 0.2 |
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.
Incubación
Durante 18-24 horas a 35-37 ºC, en aerobiosis.
Si no seobserva crecimiento, reincubar a 25-30 ºC, o dejar a 22 ºC y observar diariamente hasta 7 días.
Resultados
Un resultado positivo es por observación de los pigmentos piocianina y/o piorrubina.
La producción de piocianina se observa como una zona color azul, azul-verdoso que rodea la colonia, o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusión del pigmento.
La producción de piorrubinase observa como una zona de color rojo alrededor de la colonia o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusión del pigmento.
Cepa | Crecimiento | Producción de Fluoresceína | Producción de Piocianina |
P. aeruginosa | Bueno | + | + |
P. fluorescens | Bueno | + | - |
P. putida | Bueno | + | - |
P. mallei | Bueno | - | - |
P. stutzeri | Bueno | - | - |
S.maltophilia | Bueno | - | - |
B. cepacia | Bueno | - | - |
Escherichia coli | Bueno | - | - |
Limitaciones
- La ausencia de piocianina no descarta que el microorganismo aislado sea P. aeruginosa.
- Bajas cantidades de piocianina pueden no ser evidenciadas, por eso, ante la sospecha de su presencia, se recomienda agregar al medio de cultivo unas gotas de cloroformo, para exaltar la visualización delpigmento.
- La presencia concomitante de piorrubina y/o piomelanina, puede afectar la visualización del color característico de la piocianina.
- La producción de pigmento, puede aumentarse dejando los tubos conteniendo medio de cultivo a 22 ºC luego de haberlos incubado previamente toda la noche a 35-37 ºC.
 
Características del medio
Medio preparado color blanco-amarillo transparenteAlmacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación  |
x 100g :Código:  B02-209-05 | x 500g :Código:  B02-209-06 |

El medio utilizado es agar nutritivo o agar Plate Count (aproximadamente 15 ml por placa).
         Diluyentes:
Es importante usar un líquido de dilución desprovisto de acción bactericida. En la mayoría de los casos puede utilizarse aguacorriente, agua destilada o solución fisiológica o agua peptonada 0,1 % con pH ajustado a 7.
         Preparación de las diluciones:
Se preparan tubos estériles con 9 ml de diluyente. Para hacer las diluciones se agita, repetidas veces, la muestra. Luego se flamea la boca del frasco, se destapa, se vuelca un poco de contenido y, tapado nuevamente, se agita 10 - 15 veces para asegurar ladistribución uniforme de las bacterias del líquido.
Luego mediante una pipeta esterilizada, se toma 1 ml de muestra que se pasa a un tubo con 9 ml de diluyente. Se tiene así la muestra diluida 10 veces. Se agita esta aspirando y expeliendo el líquido de la pipeta repetidas veces, y luego, mediante otra pipeta esterilizada, se toma 1 ml del líquido diluido, el cual se pasa a un nuevo tubo con solución...