tecnologia

Metodología

Aislamiento
Para intentar que las colonias crezcan separadas tomamos un asa de siembra y se realizan resiembras en dos zonas:
Tocando con el asa la zona de la muestra se realiza una línea zig-zagueante SUAVEMENTE sobre la superficie (no hay que perforar la superficie de la muestra ) Sin tocar las anteriores zonas. Se tapa y se sella la placa con cinta adhesiva.
Se rotula latapa indicando el nombre del
1. Aislamiento de microorganismos
Frecuentemente se requiere obtener cultivos constituidos por una única especie de microorganismo para su estudio. Estos cultivos se denominan cultivos puros y está formado por células provenientes de una sola inicial y por tanto perteneciente a la misma especie. microorga-nismos se encuentran formando poblaciones mixtas yheterogéneas.
Existen diversos métodos para aislar cultivos puros entre ellos podemos destacar. Técnica de siembra en placas.
Aislamiento del suelo
Se tomo la muestra del suelo seca, y se coloco en forma de grumos dentro de la caja Petri.
Se realiza una resiembra del cultivo puro para analizar y se inocula durante 24 a 48 horas, es decir el tiempo en el que aproximadamente la bacteria ya a crecido yformado colonias separadas.

Después de las cuales de escoge una colonia aislada; para realizar las observaciones.

Para la observación de las características macroscópicas se estudia el tipo de colonia formada por la cepa.

Para las observaciones microscópicas se procede de la siguiente manera:

Se hace un frotis fresco; en un portaobjetos se pone una gota de cristal violeta con ayuda del asapreviamente esterilizada; posteriormente se toma una azada de la colonia separada y se extiende sobre el colorante, no demasiado cerca del mechero para evitar que se seque la muestra. Se cubre con el cubreobjetos cuidando que la muestra no se salga por los bordes.

Se observa en un microscopio a 10x, 45x, y a 100x utilizando el acebote de inmersión.
GRAM
Sobre un portaobjetos de vidrio,limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teñir (si es líquido) o se hace rodar el hisopo con que se tomó la muestra. Una vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no está estéril, ya no puede ser empleado para inocular los medios de cultivo. Puede usarse una aguja estéril para transferir una pequeña cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie delportaobjetos. Este material es suspendido en una gota de agua o solución salina previamente colocada sobre el portaobjetos. Cuando se trata de colonias muy pequeñas que pueden perderse en una gota de líquido se emplea una varilla delgada de madera estéril con la cual se toca la colonia obteniéndose así una fracción apreciable del desarrollo. El material se frota directamente sobre el portaobjetos, dondepuede visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama de un mechero de Bunsen hasta que el vidrio esté tan caliente que moleste al tacto pero no queme.

Se prepara un frotis, y se coloca el portaobjetos sobre un vaso de precipitados.

A continuación se tiñe la muestra:

Se le adiciona cristalvioleta por un minuto,

Se le agrega lugol por un minuto, después se lava suavemente con un chorro de agua

Se le agrega alcohol-cetonico durante 10 o 15 segundos,

Se le agrega safranina por un minuto, después se lava suavemente con un chorro de agua hasta que el agua salga sin colorante.

Una vez que la preparación esta totalmente seca, observar en los objetivos de 10, 45, y 100x, poniendoen este último el aceite de inmersión
Coloque Sobre La Mesa La Caja De Petri Con La Tapa Hacia Abajo Cerca Del Mechero Bunsen. (El Medio De Cultivo Debe Quedar Hacia La Parte Superior)
2. Con Una Sola Mano Abra La Caja De Petri Y Manténgala Cerca De La Flama Del Mechero (A No Más De 10cm)
3. En Una Zona De La Periferia Que Usted Elija, Con El Hisopo Ó Con El Asa Según Sea El Caso, Realice...