Tecnologiamedica

CAPÍTULO 4

Técnicas Analíticas

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4.1 INTRODUCCIÓN Históricamente, el desarrollo de nuevos métodos analíticos ha dependido de la aparición de nuevas tecnologías y de su introducción en el laboratorio clínico. Así, por ejemplo, los primeros métodos desarrollados fueron los gravimétricos, que surgieron al aparecer las primeras balanzas con el suficientegrado de exactitud. Con posterioridad, el empleo de una cristalería bien calibrada hizo posible la aparición y difusión de los métodos volumétricos, que ofrecían más posibilidades desde el punto de vista de su aplicación práctica. La invención del fotómetro, a finales del siglo XIX, significó un extraordinario avance al permitir la introducción de métodos basados en la absorción de la luz por unasustancia coloreada, o la detección del grado de dispersión de ésta, al pasar por una suspensión turbia. La aparición en el transcurso del siglo XX, de equipos que permiten la separación selectiva de los componentes de una muestra, como es el caso de la cromatografía y la electroforesis, la introducción de los electrodos para medición electrométrica, el desarrollo de los procedimientos deinmunoanálisis, y la entrada de los analizadores químicos y hematológicos, así como la automatización de casi todos los procesos del laboratorio (con la excepción de la toma de muestras), son algunos ejemplos del incesante desarrollo de la tecnología aplicada al diagnóstico clínico. El objetivo de este capítulo es dar a conocer los fundamentos técnicos en los que se basan los principales métodos deanálisis del laboratorio, a partir de los cuales, con la ayuda de la robótica y de la informática, han surgido los autoanalizadores actuales. En la parte final de este capítulo se presentan los principales sistemas de automatización en un laboratorio moderno. En el laboratorio proyectado hay una cartera de servicios en la que se pueden desarrollar más de 600 técnicas analíticas, estando la gran mayoría deellas fundamentadas en los métodos y técnicas que se desarrollan en este capítulo.

DISEÑO, IMPLANTACIÓN, PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS Y GESTIÓN DE UN LABORATORIO DE ANÁLISIS CLÍNICOS CON CAPACIDAD PARA PROCESAR 1000 MUESTRAS/DÍA

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4.2 FOTOMETRÍA Y ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN

Principios generales La absorción y emisión de energía en el espectroelectromagnético tiene lugar en “paquetes” separados de fotones. Se puede representar la energía radiante como una sucesión de ondas. La longitud de éstas permite dividir el espectro electromagnético en regiones.

Rayos gamma < 0,1 nm Rayos X 0.1 - 100 nm Ultravioleta 100 - 400 nm Visible 400 - 800 nm

Infrarrojo 800 nm – 0.4 mm Microondas 0.4 mm - 25 cm Ondas de radio > 25 cm

Tabla 1:Espectro electromagnético La intensidad de poder radiante es proporcional al número de fotones por segundo que son propagados por el rayo. Un haz que posee radiación de una única longitud de onda, se denomina monocromático; si contiene radiación de varias longitudes, se denomina policromático. Como se puede observar en el cuadro presentado antes, la luz visible representa solo una parte muy pequeña delespectro electromagnético. Si un haz de energía radiante incide sobre una sustancia, puede suceder que: 1. La atraviese casi sin pérdida de energía. 2. La dirección de propagación se altere por reflexión, refracción o difracción. 3. La energía sea absorbida total o parcialmente (transferencia de energía al medio). Dos leyes fundamentales rigen la práctica de la fotometría: la ley de Lambert, queestablece que la disminución del poder radiante de un haz de luz monocromática que pasa a través de un medio absorbente, es proporcional al poder radiante del haz, y la ley

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de Beer, que establece que la...