Tejidos

Protocolos
PCR
(Todos los reactivos de la PCR se mantienen en hielo en condiciones de esterilidad)
Materiales
1. Hielo frape(Todos los reactivos de la PCR se mantienen en hieloen condiciones de esterilidad)
Materiales
1. Hielo frape(Todos los reactivos de la PCR se mantienen en hielo en condiciones de esterilidad)
Materiales
1. Hielo frape(Todos losreactivos de la PCR se mantienen en hielo en condiciones de esterilidad)
Materiales
1. Hielo frape(Todos los reactivos de la PCR se mantienen en hielo en condiciones de esterilidad)Materiales
1. Hielo frape(Todos los reactivos de la PCR se mantienen en hielo en condiciones de esterilidad)
Materiales
1. Hielo frape
2. Agua MQ
3. DNA templado (E7-A2B)
4.2 tubos de microcentrífuga
5. Primers (AOX 5’ , AOX 3’)
6. dNTP´s
7. Buffer 10x
8. MgCl2
9. Taq polimerasa
10. Termociclador
Ustedes tienen las condiciones del PCR ycantidades, el gen amplificado fue el mismo para todos (E7-A2B)



Ligación de los fragmentos de ADN (E7-A2B) al vector de clonación pGEMT
Se trata en este caso de ligar losfragmentos de ADN obtenidos mediante PCR

A. ADN (E7-A2B) (previamente purificado por el método de Gel and PCR Clean-Up System qué el profe les dio)
C. tampón de ligación
D. ADNligasa T4
E. Agua estéril


2. Almacenar a -4°C
Transformación:
Materiales y Reactivos
1. Descongelar la células competentes en hielo
2. Mezclar entre 1 y 10 μl de DNA (E7-A2B) Este es el producto de ligación con 90 μl de células competentes
3. Incubar en hielo por 30 min
4. Incubar a 42°C por 1.20 min
5. Incubar en hielo por 2 min
6. Agregar 400μlde Caldo LB
7. Incubar en agitación por 30 min a 37°C
8. Inocular los 100μl de las células transformadas en una placa de agar LB + amp + IPTG+ X-GAL
Incubar por 18-24hrs.