TEORIA DE CULTIVO DE HAPLOIDES

TEORIA
INTRODUCCION

Durante el ciclo de vida las plantas superiores la mayor parte corresponde a la generación esporofitica, durante la cual las células somáticas se dividen por MITOSIS para conservar el mismo número cromosómico. En las células somáticas los cromosomas se encuentran formando pares homólogos. Cuando las células contienen dos juegos completos de cromosomas homólogos se dice queson diploides. Al llegar el momento de la reproducción se presenta un cambio en el proceso de la división de las células sexuales o gametos. Es esas células los cromosomas se duplican y después de dos divisiones sucesivas las células sexuales resultantes exhiben un solo juego de cromosoma, que es exactamente la mitad del numero diploide. Al proceso por medio del cual se generan los gametos se lellama meiosis. Debido a que las células sexuales poseen un solo juego de cromosomas se dice que son haploides.
Los gametos se producen en los órganos reproductores masculinos y femeninos que se localizan en la flor. Las anteras son los órganos encargados de producir el polen o gameto masculino, mientras que los óvulos generan a los ovarios o células sexuales femeninas. Los gametos a pesar de sercélulas haploides, pueden dividirse para formar órganos y plantas completas cuando se les cultiva en medios sintéticos apropiados.
Las plantas regeneradas a partir de las células sexuales son generalmente haploides. Estas plantas se pueden diploidizar para obtener plantas diploides homocigotas.
El método más común que se utiliza para la producción de plantas haploides es el cultivo de anteras. En1964 Guha y Maheswar; descubrieron por primera vez la inducción de embriones a partir de polen inmaduro (microsporas) de anteras de Datura innoxia cultivada in vitro; desde entonces la técnica ha sido aplicada con éxito en numerosas especies vegetales.

FUNDAMENTOS BASICOS
Como fuente de anteras se utilizan botones florales completamente cerrados. La superficie externa de los botones se esterilizasuperficialmente con solución diluida de hipoclorito de sodio comercial. Enseguida se cortan y retiran los sépalos y pétalos, y los estambres se trasfieren a una caja de Petri estéril. Una de las anteras se secciona para verificar el estado de desarrollo de los granos de polen y en caso de que sea el apropiado, se eliminan cuidadosamente los filamentos de los estambres y las anteras setransfieren inmediatamente a medio de cultivo semisólido o líquido. Debe evitarse al máximo el contacto entre los instrumentos de disección y las anteras, pues estas se dañan fácilmente. Las anteras dañadas deben descartarse, ya que las lesiones tienden a formarse callosidades durante el cultivo. Cuando los botones florales son demasiado pequeños puede usarse un estereomicroscopio y pinzas de disecciónde una punta fina.

Durante el periodo de incubación en condiciones controladas, las paredes de las anteras van tomando una coloración café, y a las 2-8 semanas se abren por la presión ejercida por el crecimiento de los embriones o del tejido calloso derivado de los granos de polen. Los embriones se desarrollan y forman plántulas que emergen de las anteras. Cuando alcanzan una altura de 3-5 cm esconveniente transferirlas individualmente a un medio de cultivo que favorezca su desarrollo, y posteriormente pueden colocarse en suelo estéril. Las plántulas recién trasferidas al suelo deben mantenerse de preferencia en un ambiente con alta humedad relativa hasta que las raíces se desarrollen bien.

FORMACIÓN DE CALLOS

En diversos géneros, el crecimiento de las microsporas en mediossintéticos produce callos en vez de embriones. A veces, las primeras divisiones de las microsporas dan origen a estructuras organizadas que incluso generan embriones. Sin embargo, las células de esos embriones pueden proliferar posteriormente. En ocasiones se pueden encontrar embriones y callos en la misma antera.
La regeneración de plantas a partir de los callos se consigue a través de organogénesis...