teorias

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA

SEPARACIONES POR
CROMATOGRAFÍA
Conceptos generales.
Clasificación de los métodos cromatográficos.
Separación cromatográfica
Esquema básico de un cromatógrafo
Cromatografía líquida de alta resolución. HPLC.
Cromatografía de gases

Cromatografía: técnica
de separación en la cual,
los componentes de la
muestra, se distribuyen
entre dos fases dediferente naturaleza, como
consecuencia de la
variación de velocidad que
se establece al ser
arrastrados por una fase
móvil, líquida o gaseosa, a
través de una fase
estacionaria, sólida o
líquida.

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA

Las fases cromatográficas son dos:
*La fase móvil: que fluye a través de una fase
estacionaria, arrastrando con ella a loscompuestos de la mezcla.
*La fase estacionaria: en la cual están
retenidos los componentes de la muestra, y a
través de la cual fluye la fase móvil
arrastrando a los mismos.

La cromatografía fue originalmente descrita
por Tswett en 1906
Ideó un método para separar pigmentos de
las plantas utilizando un tubo de vidrio lleno
de CaCO3
Después de añadir un extracto de las plantas
y lavarlo conun disolvente orgánico observó
que se separaban diferentes bandas
coloreadas en el interior de la columna.

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SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
Los componentes de la muestras se
distribuyen en el interior del lecho
cromatográfico al ser arrastrados por la fase
móvil
Las especies individuales quedan retenidas
en la fase estacionaria en función de las
interacciones que tienen lugartales como:
Adsorción superficial
Solubilidad
carga

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
tiempo de retención tR: tiempo
que tarda cada sustancia en
abandonar el sistema
cromatográfico. Esta retención se
ejerce en función de las
características moleculares de
cada compuesto.
Elución: proceso por el cual
todos los solutos terminan por
abandonar la columna

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍALa aplicación práctica de
la cromatografía consiste
en hacer pasar la fase
móvil a través de la
columna cromatográfica
que contiene la fase
estacionaria, donde están
retenidos los solutos.

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
el proceso cromatográfico depende de una
constante de equilibrio:

KD =

n /V
n Vm
Cs
Vm
= s s = s ⋅
= k´⋅
Cm nm / Vm nm Vs
Vs

K ´=

tR − t0
t0

tR=es el tiempo de retención del soluto.
t0= es el tiempo de retención de la fase móvil, o tiempo que
tarda la fase móvil en atravesar la columna cromatográfica.

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SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS
TIPO

F.ESTACIONARI

F. MÓVIL

INTERACCION

Adsorción

Sólido

líquido-gas

fuerzas V.W.

Cambio ionico

Resina

Líquido

f.elect.Exclusión

Gel

líquido

tamaño part.

Afinidad

Sólido

líquido

interac bio.

Partición

Líquido

líquido-gas

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
También se pueden clasificar en función de
la forma en la que se lleve a cabo:
a) PLANA: La fase estacionaria se coloca
sobre una superficie plana
b) COLUMNA: se utiliza un tubo de vidrio
cilíndrico como soporte de la faseestacionaria y se hace pasar a través de ella
la fase móvil.

solubilidad

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
En cromatografía líquida podemos distinguir dos
modalidades básicas:
Cromatografía en fase normal: fase móvil no polar y
la fase estacionaria es polar (gel de sílice)
Cromatografía en fase invertida: fase móvil de
naturaleza polar y fase la estacionaria no polar
(cadenahidrocarbonada que puede ser :
*Cadena larga: C-18
*Cadena intermedia: C-8
*Cadena corta: C-2

SEPARACIONES POR CROMATOGRAFÍA
También en cromatografía de partición hay
que establecer otra distinción según sea la
retención de la fase estacionaria líquida sobre
el sólido soporte:

Convencional o clásica cuando la fase
estacionaria líquida está retenida por
adsorción sobre el sólido soporte
Fases...