Tesis Impacto Del Petroleo Sobre La POBLaCION De Cianobacterias

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA
FACULTAD DE CIENCIAS
Departamento de Genética y Microbiología

IMPACTO DEL PETRÓLEO EN LA DISTRIBUCIÓN Y
BIOMASA DE LAS CIANOBACTERIAS EN
ECOSISTEMAS NATURALES Y ARTIFICIALES

Elia Diestra Villanueva
2005

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BARCELONA
FACULTAD DE CIENCIAS
Departamento de Genética y Microbiología

IMPACTO DEL PETRÓLEO EN LA DISTRIBUCIÓN YBIOMASA DE LAS CIANOBACTERIAS EN
ECOSISTEMAS NATURALES Y ARTIFICIALES

Memoria redactada para optar al
Grado de Doctor en Biotecnología
por la universidad Autónoma de
Barcelona, por Elia Diestra
Villanueva.

VºBº de los Directores de Tesis

Dra. Isabel Esteve Martínez

Dr. Antonio Solé i Cornellà

Bellaterra, Octubre del 2005

La ciencia, a pesar de sus progresos increíbles, nopuede
ni nunca podrá explicarlo todo. Cada vez ganará nuevas
zonas a lo que hoy parece inexplicable. Pero las rayas
fronterizas del saber, por muy lejos que se eleven,
tendrán siempre delante un infinito mundo de misterio.

Gregorio Marañón

ÍNDICE

Índice

Resumen

i

Capítulo I. Introducción

3

Capítulo II. Material y Métodos

2.1. Caracterización y Muestreo de TapetesMicrobianos Naturales y
Artificiales

20

2.1.1. Descripción de los ecosistemas naturales estudiados

20

2.1.2. Descripción de los ecosistemas artificiales

28

2.1.3. Procesamiento de muestras

30

2.1.4. Microscopía Láser Confocal

30

2.2. Cultivos Celulares. Microcoleus consorcio

32

2.2.1. Cultivo de enriquecimiento

32

2.2.2. Aislamiento de Microcoleus consorcio32

2.2.3. Identificación

32

A. Aplicación de técnicas microscópicas de alta resolución

32

Microscopía Láser Confocal

32

Microscopía Electrónica de Transmisión

33

Microscopía Electrónica de Barrido

34

B. Técnicas Moleculares

34

Extracción de DNA

34

PCR-DGGE

35

Librería Genética y Análisis del Polimorfismo de Restricción de
la longitud delFragmento de DNA

36

Secuenciación del rRNA

37

Número de Acceso

38

C. Técnicas de Análisis Químico

41

Capítulo III. Identificación y distribución de las cianobacterias en los tapetes
microbianos de Salins-de-Giraud en un ciclo día-noche

Introducción

43

Resultados

44

Identificación y distribución de las en los tapetes microbianos
de la Camarga

44

Distribuciónde Microcoleus chthonoplastes durante un ciclo
día-noche

45

Discusión

46

Capítulo IV. Diversidad de las cianobacterias en ambientes naturales y artificiales
contaminados por petróleo

Introducción

52

Resultados y Discusión

54

A. Análisis de la diversidad y determinación de la biomasa de las
cianobacterias en tapetes microbianos de de Europa con distinto
grado decontaminación

54

B. Análisis de la diversidad y determinación de la biomasa de
las cianobacterias en Mesocosmos

57

Capítulo V. Aislamiento y caracterización de un consorcio de microorganismos para
degradar petróleo

Introducción

67

Resultados

70

Aislamiento de un consorcio de microorganismos

70

Caracterización del consorcio mediante técnicas microscópicas

71Determinación de las condiciones de cultivo que favorecen
el crecimiento óptimo de Microcoleus consorcio

72

Identificación de los microorganismos que constituyen el
consorcio por técnicas moleculares
Discusión

72
73

Conclusiones

84

Referencias Bibliográficas

87

Agradecimientos

Resumen

En el presente trabajo se ha estudiado el efecto del petróleo en lascianobacterias,
bacterias fototróficas oxigénicas que forman las poblaciones dominantes de los tapetes
microbianos. Se trata de ambientes bentónicos estratificados situados en costas litorales
y que se encuentran en ocasiones expuestos a los vertidos accidentales de petróleo. El
papel de las cianobacterias en la bioreparación del crudo es un tema que suscita mucho
interés, aunque no se han dado, hasta...