Test ABTS

CIPNA

UNAS
Universidad Nacional Agraria de la Selva
National Agrarian University of the Jungle

Centro de Investigación de Productos
Naturales de la Amazonía

DETERMINACION DE RADICALESPEROXILOS
I.

Principio
En ausencia de antioxidantes, la oxidación es inducida por radicales formados por
descomposición termal del compuesto soluble en agua, 2,2’-azobis(2-amidopropano)hidrocloride (ABAP), generando un compuesto de color verde debido a la formación del
estable radical catiónico 2,2’-azinobis(3-etilbenzotiazolino-6-ácido sulfónico) (ABTS+).
El producto de oxidación esmedido por espectrofotometría, cuya absorción máxima es
a 414 nm.
II.
Materiales
- Espectrofotómetro UV/VIS
- Cuvetas 1 ml
- Micropipetas (1000 l, 200 l, 100 l)
III.
-

- Baño María 37C
-Hielo
- Pipetas, tips.

Reactivos
2,2’-azobis(2-amidopropano) hidrocloride (ABAP).
2,2’-azinobis(3-etilbenzotiazolino-6-ácido sulfónico) (ABTS).
Solución de buffer fosfato, PBS.
Agua destiladadesionizada ddH2O.

IV.
Procedimiento
1. Preparar las siguientes soluciones stock en agua destilada desionizada y pH adecuado.
Soluciones
2.25 mM ABTS
100 ml
20 mM ABAP
100 ml
PBS (Solución deBuffer Fosfato) pH 7.4
Mezclar para 1 L
154 mM Cloruro de sodio (NaCl)
2.7 mM Fosfato de sodio hepta hidratado (Na2HPO47H2O)
1.5 mM Fosfato de potasio (KH2PO4)
2. Preparar la siguientesolución: Mezclar 10 ml de 2.25 mM ABTS, 10 ml de 20 mM
ABAP y 80 mL de PBS (pH 7.4) SOLUCION DE RADICALES
3. Incubar a 70C en baño maría (water bath) por 20 minutos. Luego dejar enfriar en hielo
durante 5- 10 minutos.
El compuesto resultante es una solución de color verde con una absorbancia de
aproximadamente 0.7 – 0.8 a 414 nm.

4. Agregar 10 l de muestra a 990 l de la solución de radicalesABTS en una cuveta de
poliestireno (1 cm x 1 cm x 4.5 cm).
La muestra debe estar en una concentración 10x de la concentración final.
CIPNA-UNAS
Science and Nature for the Benefit of Human Kind...