TEST ELISA
Páginas: 2 (289 palabras)
Publicado: 23 de noviembre de 2013
Procedimiento para realizar el test Elisa:
Paso 1:
Extraer muestra de la carne que consideremos sospechosa de contener trazar de carne de caballo mediante una espátula. Coger fragmentocomo indicado en la figura 1.
Paso2:
Trasferir la muestra al tubo de muestra, y añadir 2 ml de disolución tampón al tubo. Agitar vigorosamente durante 30 sec. Dejar reposar la muestra durante2 horas a temperatura ambiente.
Paso 3.1:
Transferir 100 Ul de la disolución patrón (negativa), de carne de caballo (Positiva) que contiene el kit, y la muestra a analizar en los pocillosque contienen las tiras reactivas.
Paso 3.2:
Dejar reposar las disoluciones patrón (positivo y negativo) y la muestra a analizar durante 30 min a temperatura entre 25 y 28ºC. Tras estaincubación, extraer el contenido de los pocillos, y lavar mediante la disolución de lavado (disolución rosa), mediante el instrumento diseñado para ello. Enjuagar con la disolución de lavado 3veces, utilizando para ello entre 300 y 400 ml.
Paso 3.3:
Añadir 100 ul del anticuerpo-HRP conjugado a cada pocillo, utilizando una pipeta. Dejar reaccionar durante 20 min. Enjuagar lastiras reactivas con la solución de lavado 4 veces como en el paso 3.2.
Paso 4:
Añadir 100 ul de agente reactivo colorante a todos los pocillos, mediante una pipeta de 100 ul. Agitarbrevemente la placa de pocillos entre 5 y 10 sec.
Los pocillos del patrón positivo y los que contengan carne de caballo se colorearan en azul. El color se desarrolla durante 5 min.
Paso 5:
Añadir100 ul de disolución estabilizante de color (el color azul se torna a amarillo). De este modo el color se mantiene durante más horas (Hasta 5h).
El resultado se puede registrar mediantefotografía o bien mediante lectura con lector estándar del test ELISA (450 nm). La intensida del color amarillo es proporcional al porcentaje del contenido en carne de caballo en la muestra.
Paso 1:
Extraer muestra de la carne que consideremos sospechosa de contener trazar de carne de caballo mediante una espátula. Coger fragmentocomo indicado en la figura 1.
Paso2:
Trasferir la muestra al tubo de muestra, y añadir 2 ml de disolución tampón al tubo. Agitar vigorosamente durante 30 sec. Dejar reposar la muestra durante2 horas a temperatura ambiente.
Paso 3.1:
Transferir 100 Ul de la disolución patrón (negativa), de carne de caballo (Positiva) que contiene el kit, y la muestra a analizar en los pocillosque contienen las tiras reactivas.
Paso 3.2:
Dejar reposar las disoluciones patrón (positivo y negativo) y la muestra a analizar durante 30 min a temperatura entre 25 y 28ºC. Tras estaincubación, extraer el contenido de los pocillos, y lavar mediante la disolución de lavado (disolución rosa), mediante el instrumento diseñado para ello. Enjuagar con la disolución de lavado 3veces, utilizando para ello entre 300 y 400 ml.
Paso 3.3:
Añadir 100 ul del anticuerpo-HRP conjugado a cada pocillo, utilizando una pipeta. Dejar reaccionar durante 20 min. Enjuagar lastiras reactivas con la solución de lavado 4 veces como en el paso 3.2.
Paso 4:
Añadir 100 ul de agente reactivo colorante a todos los pocillos, mediante una pipeta de 100 ul. Agitarbrevemente la placa de pocillos entre 5 y 10 sec.
Los pocillos del patrón positivo y los que contengan carne de caballo se colorearan en azul. El color se desarrolla durante 5 min.
Paso 5:
Añadir100 ul de disolución estabilizante de color (el color azul se torna a amarillo). De este modo el color se mantiene durante más horas (Hasta 5h).
El resultado se puede registrar mediantefotografía o bien mediante lectura con lector estándar del test ELISA (450 nm). La intensida del color amarillo es proporcional al porcentaje del contenido en carne de caballo en la muestra.
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