Tgo Y Tgp

Objetivo de la práctica:

Determinar TGO y TGP por un Método colorimétrico y comprobar la importancia clínica que estas enzimas tienen.

Introducción teórica:


MÉTODO COLORIMÉTRICO SEGÚN REITMAN Y FRANKEL PARA LA DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE TRANSAMINASA GLUTÁMICO OXALACÉTICA (GTO) Y TRANSAMINASA GLUTÁMICO PIRÚVICA (GTP) EN SUERO





SIGNIFICACION CLINICA


Lastransaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo, que catalizan la transferencia de un grupo amino de un aminoácido a un cetoácido, en una de las más importantes reacciones del metabolismo proteico.
El interés clínico está centrado especialmente en dos de E:llas: GOT (transaminasa glutámico oxalacética} y GPT (transaminasa glutámico pirúvica).
Estas enzimas tienen acción eminentementeintracelular por lo que la actividad sérica en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de actividad será evidencia de un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales resultan particularmente importantes corazón e hígado.
Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT, debido a la liberación al torrentesanguíneo de esta enzima, tan abundante en el músculo cardíaco.
En este caso no existirá aumento en la actividad sérica de GPT o será mínimo.
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis de tejido, habrá también un incremento considerable de la actividad sérica transaminasas, incluso antes de la aparición de síntomas clínicos como ictericia.
En este caso, GPT serála enzima predominante debido a su gran concentración en el tejido hepático.





FUNDAMENTOS DEL METODO





GOT Cataliza la reacción:

GOT
I-aspartato + a-cetoglutarato glutamate + oxalacetato

GPT cataliza la reacción:GPT
I-alanina + a-cetoglutarato glutamato + piruvato

El piruvato formado (el oxalacetato es inestable y se transforma parcialmente en piruvato), reacciona con la 2,4-DNFH produciéndose, en medio alcalino, un compuesto coloreado que se mide a 505 nm.

Material a Utilizar:

a) Material para extracción sanguínea
b) Material volumétrico adecuado.c) Frasco de vidrio color caramelo.
d) Tubos de fotocolorímetro o cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
e) Reloj o Cronómetro
f) Pipetas graduadas o Micropipetas
g) Vaso de precipitado
h) Aplicadores de madera
i) Tubos de ensaye
j) Gradilla para tubos de ensaye
k) Probeta graduada de 100 ml
l) Matraz de 1000 ml




Equipo aUtilizar:

a) Espectrofotómetro o fotocolorímetro
b) Baño María a 37°C.
c) Centrífuga


Reactivos:


REACTIVOS PROVISTOS

Sustrato GOT: comprimidos conteniendo 0,22 mmol de I-aspartato, 4,4 umol de alfa-cetoglutarato y 220 umoles de buffer fosfatos para pH 7,4.
Sustrato GPT: comprimidos conteniendo 0,44 mmol de dl-alanina, 4,4 umol de alfa-cetoglutarato y 220 umoles de bufferfosfatos para pH 7,4.

Reactivo 2,4-DNFH: comprimidos conteniendo cada uno la cantidad necesaria de 2,4-dinitrofenil hidracina para una concentración final de 1 mmol/l.
Standard: solución de piruvato de sodio 0,68 mmol/l.


REACTIVOS NO PROVISTOS

Diluyente para Enzimas concentrado, provisto separadamente por Wiener lab.
Agua destilada.
Acido clorhídrico concentrado.


INSTRUCCIONES PARA SUUSO

Sustrato GOT o GPT, preparación: disolver cada comprimido de sustrato con 2,2 ml de agua destilada. Mezclar por inversión hasta disolución completa.
Reactivo 2,4-DNFH, preparación: transferir un comprimido de Reactivo 2,4-DNFH a un frasco color caramelo de 25 a 30 mi de capacidad. Agregar 2,5 m I de HCI concentrado y 22 m I de agua destilada. Mezclar hasta disolución completa. Rotular...