Tinción De Gram

RECOMENDACIONES PARA LOS ESTUDIANTES REGLAS DE LABORATORIO 1. Durante las prácticas de laboratorio, siempre deberán utilizar la bata de laboratorio abotonada. Utilizar durante toda la práctica gorro, mascarilla y guantes. 2. No deberán sacar del Laboratorio ningún equipo, medios o cultivos microbianos sin autorización. 3. Evitar la acumulación sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionadoscon la práctica de laboratorio. 4. Está prohibido ingerir y/o almacenar cualquier tipo de alimento o bebida dentro del Laboratorio. 5. Por seguridad no deberá pipetear oralmente ningún tipo de cultivo microbiano, esta actividad deberá realizarse con pipetas accionadas de forma mecánica o automática. 6. No se admitirán visitas personales que distraigan la atención y pongan en riesgo la seguridad enel trabajo que se realiza.

PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO 1. Antes y después de cada práctica de laboratorio los alumnos deberán limpiar las mesas de trabajo con el desinfectante que se le proporcionará para este fin. 2. Cuando se utilice el mechero, este deberá colocarse alejado del microscopio y otros equipos así como de los cuadernos y prendas de vestir. 3. Al terminar cada práctica elestudiante deberá asegurarse de que los materiales de desecho u objetos contaminados sean colocados en recipientes específicos para ello. 4. Al inicio y al finalizar el trabajo en el laboratorio los alumnos deberán lavarse las manos con agua y jabón y posteriormente desinfectarse con alcohol.

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PRÁCTICA #1 PREPARACIÓN DE FROTIS BACTERIANO. TINCIÓN DE GRAM

Bacteria Gram NegativaBacteria Gram Positiva

OBJETIVO Efectuar correctamente la preparación de un frotis bacteriano y someterlo luego a las tinciones comúnmente utilizadas.

INTRODUCCIÓN Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de campo claro o de campo oscuro para hacer la descripción morfológica de éstos. El microscopio de uso más común es el decampo claro, en el que la observación de células vivas es limitada debido a que las células son incoloras y permiten el paso de una gran cantidad de luz. La observación de frotis teñidos es más recomendable. El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre una superficie transparente, en la cual se fijan y tiñen los microorganismos. De acuerdo al número de solucionescolorantes y a los objetivos de estudio se pueden realizar diferentes tipos de tinciones como son: Simple, diferencial, negativa y selectiva. La tinción de Gram es un método de identificación de bacterias mediante una tinción específica. Esta técnica fue desarrollada en 1884 por el médico Danés Hans Christian Joachim Gram, y actualmente es un método utilizado universalmente. Sobre la base de su reacción ala tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos: Grampositivas y Gramnegativas. Las bacterias Gram (+) y Gram (-) tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares. La función de la pared de la célula bacteriana es dar su tamaño y forma al organismo así como prevenir la lisis osmótica. Un microorganismo Gram (+) debepresentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve Gram (-). Esto indica la importancia de la pared para la retención o escape del colorante.

Introducción a la Biotecnología. UCA.

Ciclo I, 2011.

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Aspectos cruciales de la tinción de Gram: 1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. Elyodo por sí solo tiene poca afinidad con las células. 2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las células Gram (+). dan (+) EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3) Cultivos más viejos de 24 horas pueden perder su habilidad de retener el complejo cristal. complejo...