Tinción de Gram

Tinción o coloración de Gram
La coloración de Gram es la que se utiliza más habitualmente en el laboratorio microbiológico para la observación de especímenes, además de facilitar la observación delas bacterias permite diferenciar dos grandes grupos de eubacterias: grampositivas y gramnegativas. Actualmente existen varias modificaciones de la técnica original.
TÉCNICA
1. Una vez fijado elextendido cubrir la superficie con cristal violeta o con violeta de genciana (colorante primario) y dejar en contacto durante 1 minuto.
2. Lavar con abundante agua.
3. Cubrir con lugol (mordiente)durante 1 minuto.
4. Lavar con abundante agua.
5. Inclinar el portaobjeto y dejar gotear el alcohol acetona (decolorante) hasta que el preparado deje de perder color.
6. Lavar con agua.
7. Cubrir elpreparado con fucsina básica (contracolor) durante 1 minuto.
8. Lavar con abundante agua.
9. Dejar secar el preparado al aire.
10. Observar con objetivo de inmersión.
FUNDAMENTO
La afinidadgrampositiva o gramnegativa de las bacterias depende de la composición química de la pared celular y en parte de su estructura física.
Al observar el preparado con el microscopio, después de realizar losprimeros cuatro pasos, todas las bacterias se ven color violeta. Después de aplicar el decolorante algunas bacterias conservan su color mientras otras se decoloran. Las que mantienen el color violeta sedenominan grampositivas y las que no pierden se llaman gramnegativas. Esto se debe a que los decolorantes orgánicos utilizados abren los poros de la membrana externa de las bacterias gramnegativas(constituida principalmente por lipoproteínas y lipopolisacáridos) y permiten la salida del colorante principal, de modo que los microorganismos quedan desprovistos de color. Al agregar el contracolorestos quedan teñidos de rojo.
Existen variantes de este método en las que la fucsina es reemplazada por safranina, también de color rojo.
VENTAJAS
• Es un método rápido y sencillo.
• Permite...