Tinción de Gram

Tinción de Gram
OBJETIVO: Identificar la morfología (coco, bacilo, etc), agrupación y el tipo de tinción(Gram positiva o Gram negativa) de muestras biológicas.

FUNDAMENTO: La tinción de Gram esuna técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnostico microbiológico, fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884.
La mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando se sospechainfección bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas y examinadas al microscopio.
Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta (colorantebásico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste).
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda delmordiente (lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aundespués del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observaran de color purpura o violeta el microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuandoson tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristalvioleta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio
Materiales:
Aplicador
Asa
PicetaCuba de tinción
Mechero
Portaobjetos
Tubo de ensaye
Agitador
Fenol (para limpiar la mesa donde se va a trabajar)
Equipo:
Microscopio
Reactivos
Cristal violeta
Solución de lugol
Alcoholcetona
Safranina
Aceite de inmersión


OBSERVACIONES

Muestras observadas
Heces fecales

Morfología: cocos y bacilos
Agrupación: estreptococos y estafilococos
Tinción de Gram: cocos gram...