tinción de gram

Práctica 2. Tinción de Gram

OBJETIVO
Que el alumno aprenda a clasificar las bacterias aplicando una técnica diferencial como es la tinción de Gram.
MATERIAL Y REACTIVOSMATERIAL
REACTIVOS
Microscopio
Cristal violeta
5 Portaobjetos
Lugol
Asa de siembra
Alcohol-Acetona
Pinzas
Safranina
Guantes de látex
Aceite de inmersión
Mechero BunsenAgua destilada

METODOLOGÍA
1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio.
3. Es necesaria muy pocacantidad de agua, por la que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
4. Flamear elasa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa desiembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.
5. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercandoel porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.
6. Teñir concristal violeta 1min.
7. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
8. Cubrir con Lugol 1min.
9. Lavar con agua el exceso de Lugol.
10. Decolorar con alcohol-acetona osimplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color (30seg).
11. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
12. Teñir con safranina 1min.
13.Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
14. Secar la preparación.
15. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.