Tinción De Gram

Tinción de Gram

1

Tinción de Gram
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo
de tinción diferencial empleado en Bacteriología para la
visualización de bacterias, sobre todo en muestras
clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés
Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se
utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular
bacteriana como para poder realizar unaprimera
aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias
que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram
negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o
grosella.
Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio
tras ser teñidas con la tinción de Gram.

Metodología
• Recoger muestras.
• Hacer el extendido en espiral.
• Dejarsecar a temperatura ambiente o fijarlas
utilizando un mechero.
• Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al
calor (flameado 3 veces aprox.)
• Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de
genciana) y esperar 1 minuto. Todas las células
gram positivas y gram negativas se tiñen de color
azul-púrpura.
• Enjuagar con agua.
• Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.

Bacterias Clostridiumperfringens (Gram positivas).

• Enjuagar con agua.
• Agregar acetona y/o alcohol y esperar de 8 a 15
segundos aproximadamente (parte crítica de la
coloración).
• Enjuagar con agua.
• Tinción de contraste agregando safranina o fucsina
básica y esperar 45 segundos. Este tinte dejará de
color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
Para observar al microscopio óptico es conveniente
hacerlo a100x con aceite de inmersión.
Explicación
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas
las células bacterianas (tanto Gram positivas como
Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El

Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis
(bacilos morados) que producen una enfermedad
llamada Carbunco, encontrados en una muestra
de líquido cerebroespinal. Si hubiera una especia
debacteria Gram negativa apareceria de color
rosa. El resto son leucocitos atacando la
infección.

Tinción de Gram

2

lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI
(yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para
solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal
violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana.
El I2 entra enlas células y forma un complejo insoluble en solución
acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la
decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal
violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que
los Gram negativos sí lo hacen.

Una tinción Gram en la que observamos un
mezclado de Staphylococcus aureus(Coco Gram
positivo) y Escherichia coli (bacilo Gram
negative)

Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una
coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo,
como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste
las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.

La safranina puede o no utilizarse, no escrucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de
manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Gram positivas se verán azul-violáceas y las
Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884.En este método de tinción,
la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar
durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se añade luego una solución de
yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; después se lava el portaobjetos con alcohol hasta que éste
no arrastre más colorante....