tinción diferencial de Gram

____UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA







LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PRACTICA 2: TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM






PROFESORA: GRETTY VILLENA

GRUPO: F
INTEGRANTES
PEDRO JESUS CENTENO TORRES
YNGRID DE LA CRUZ
MARIA ALEJANDRA GIL POLO
JORGE ANDREA RIVERO MONTEAGUDO




TINCIÓN DIFERENCIAL DE GRAM


INTRODUCCIÓN
La tinción diferencial de Gram es una delas técnicas más utilizadas en bacteriología, fue creada por Hans Christian en 1804 y permite distinguir de acuerdo con la estructura y grosor de la pared bacteriana en dos grandes grupos de microorganismos: Gram positivo, los cuales quedan teñidos de color purpura oscuro y Gram negativo, los cuales quedan teñidos de un color entre rosa y rojizo.

OBJETIVO
Clasificar 3 especies bacterianas(Staphylococcus aureus, E. coli y bacillus cereus) en
JUSTIFICACIÓN
La diferenciación en dos grandes grupos de microorganismos (Gram positiva y Gram negativa) es de suma importancia sobre todo en el campo de medicina para la idoneidad del tratamiento dado que el comportamiento como patógeno es diferente en ambas; además mediante la tinción diferencial de Gram es fundamental para la diversidad ytaxonomía bacteriana.
MARCO TEÓRICO
Diferencias entre Gram positiva y Gram negativa.
BACTERIAS GRAM POSITIVAS
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
Posee una pared gruesa de Peptidoglucano. Puede tener hasta 40 capas de mureina
Poseen una pared celular más compleja:
-Pared celular interna
-Pared de peptidoglucano con una sola capa entre la membrana interna y la externa
- Bicapa lipídica externa

Notiene membrana externa.
Posee una membrana externa que mantiene la estructura celular y es barrera impermeable a macromoléculas, ofrece protección en condiciones adversas


No tiene espacio periplasmático.
Tiene un espacio periplasmático entre la superficie externa de la membrana citoplasmática y la interna de la membrana externa.



Los organismos utilizados en está práctica fueron:BACTERIA
TIPO
CARACTERÍSTICAS

Bacillus cereus

Gram positivo
Mide de 1-1.2x3-3.5µm. Tiene forma de bastón alargado. Presenta flagelos peristricos (del Rosario, 2000)

Escherichia coli

Gram negativo
Son ligeramente alargadas. Mide aproximadamente 0.7x2.5 µm. Su volumen es de 1 µm3 (Segal, 2005)

Staphylococcus aureus

Gram positiva
Tiene forma de coco y formar una asociación en formade racimo de uva. Su tamaño oscila oscila entre 0.8 a 1,5 micras de diámetro (INSHT, 2012).

Durante la tinción de Gram, las bacterias se tiñen primero con cristal violeta (0,5g/100ml) que permita realizar un tinción simple inicial, muy resistente a la descoloración (Baker, 1970). Para intensificar la reacción química entre el colorante y los componentes ácidos bacterianos, se añade unmordiente que aumente la interacción entre la célula y el colorante al formar un complejo insoluble (Complejo Cristal Violeta-Yodo) (Prescott, 2002). Este puede ser una solución Yodada preparada a partir de 1g de Yodo, 2g de Yoduro de Potasio y 300 ml de Agua (Baker, 1970). A continuación las bacterias grampositivas se tratan con alcohol o acetona o aceite de anilina; se cree que este contrae los porosdel grueso peptidoclucano. En consecuencia, el complejo colorante-yodo queda retenido durante este corto paso de decoloración y las bacterias permanecen morados. Por el contrario, el peptidoglicano gramnegativo es muy fino y no presenta tanto entrecruzamiento y contiene poros más granes. Además el tratamiento con alcohol puede extraer suficientes lípidos de la membrana externa gramnegativa comopara aumentar aún más su porosidad (Madigan, 2009). Bacterias Gram zPositivas tienen un pH de 2, más ácido que las Gram Negativas cuyo pH es 5. Esto también ayuda en la resistencia a la descoloración del Cristal Violeta. (Baker, 1970). Finalmente, se realiza una tinción de contraste utilizando colorantes como Rojo Neutro, Safranina o Fuchina Fenicada diluida (Baker, 1970).
Fundamento de la...