Tinción Gram

Tinción Diferencial de Gram

Escuela de Química, Universidad Nacional, Laboratorio de Biotecnología

Heredia, Costa Rica. 07/09/2012

|Abstracto: Se clasificaron tres tipos de bacterias mediante el método de tinción de Gram, dos de ellas conocidas y una |
|incógnita: Micrococcus Ureae presente en la orina, Lactobacillus Helveticus presente en el yogurt y una bacteria patógena que|
|será tratada como incógnita. La tinción de Gram clasifica las bacterias en grampositivas y gramnegativas y su método se basa en |
|la cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de ciertas bacterias. La utilización de una disolución |
|de cristal violeta tiñe todas las células bacterianas, sin embargo las que tiene una capa gruesa de peptidoglucano forman un ||complejo con el yodo y el ácido teicoico difícil de remover por la acción de un decolorante, estas serán Grampositivas con un |
|color característico azul. La células bacterianas con una capa delgada de peptidoglucano se decoloran, por ejemplo, con la |
|acción del alcohol; por lo que una tinción posterior con safranina las vuelve a teñir, pero esta vez de un color rojo, ||clasificándose como gramnegativas. Las bacterias Micrococcus Ureae y Lactobacillus Helveticus se clasifica como grampositivas. |
|La muestra incógnita se tiño de rojo por lo que se clasifica como gramnegativa, posteriormente se conocía que se trataba de |
|Escherichia Coli. |Introducción

La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para distinguir entre varios tipos de células bacterianas. Una tinción diferencial típicamente consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para teñir a todas las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el cual remueve el colorante solo deciertos tipos de células y finalmente un colorante de contraste, el cual tiñe las células recién decoloradas pero no tiene efecto sobre las células que aún retienen el colorante primario.[1]

La tinción de Gram es la técnica principal utilizada para el examen microscópico de bacterias. Casi todas las bacterias de importancia clínica pueden detectarse con este método; las únicas excepciones sonlos microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las células del huésped, los que carecen de pared celular y los que tienen un tamaño insuficiente para ser observado por el microscopio óptico. La tinción de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX y puede utilizarse para separar la mayoría de las especies bacterianas en dos grandes grupos, a saber, las quecaptan el colorante básico, cristal violeta (es decir, las bacterias grampositivas) y las que pierden este colorante por lavado con el decolorante alcohol o acetona (es decir, las bacterias gramnegativas).[2]

Si bien hay modificaciones de la tinción de Gram clásica que implican cambios en los reactivos y en los tiempos, los principios y resultados son iguales para todas las modificaciones.El procedimiento clásico de la tinción de Gram consiste en fijar el material orgánico a la superficie del portaobjetos del microscopio ya sea por calor o por metanol. La fijación con metanol preserva la morfología de las células huésped, así como de las bacterias, y es especialmente útil para examinar muestras de sangre. Después de la fijación el primer paso en la tinción de Gram es la aplicacióndel colorante principal cristal violeta (metil rosanilina o violeta de genciana). Luego se aplica un mordiente, el yodo, para que el colorante alcalino se una a la pared celular de las bacterias a través de enlaces químicos. La decoloración distingue las células grampositivas de las gramnegativas. Después de la decoloración los microorganismos que aparecen como grampositivas retienen el cristal...