Tinción Microbiólogica

TINCIÓN MICROBIOLOGICA
INTRODUCCIÓN
Una técnica fundamental es la que se ha desarrollado a partir de las preparaciones para el examen por microscopía óptica. Hay dos formas generales de se emplean. Una es la suspensión de lo organismos en un liquido (montaje humedo). La otra, utiliza la muestra de películas o frotis secos, fijados y teñidos.
Las técnicas de tinción que se utilizan de lamuestra de películas o frotis secos, usan muchos compuestos organicos coloreados (colorantes) para teñir microorganismos a fin de poder observarlos al microscopio. Las principales funciones de la tinción son:
1. Observar mejor el aspecto morfológico general de los microorganismos.
2. Identificar partes estructurales o morfología fina de los microorganismos.
3. Ayuda a identificar y/odiferenciar organismos similares.
Tinción de Gram
En este procedimiento la extensión de células previamente fijada se somete a las siguientes soluciones en el orden que se indica: cristal violeta, lugol (solución de yodo), alcohol (agente decolorante) y safranina. Las bacterias teñidas por este método se clasifican en dos grupos, uno de ellos, el de las bacterias Gram-positivas, que conservan elcolorante cristal violeta, y por tanto aparecen de color violeta oscuro. El otro grupo de las bacterias Gram-negativas pierden el cristal violeta al ser lavados con alcohol y al teñirse con el colorante de contraste safranina, que es rojo, aparecen de este color.
PROCEDIMIENTO.
1. Colocar el frotis, es decir, una fina película de la muestra sobre el portaobjetos.
2. Fijar el frotis calentandoligeramente el portaobjetos con la llama de un mechero Bunsen, lo cual hará que las bacterias se fijan a la lamina.
3. Adicionar unas gotas de violeta de genciana y dejar por un minuto.
4. Lavar con agua, para retirar el exceso del anterior colorante.
5. Añadir unas gotas de lugol (solución de yodo) y dejar por un minuto.
6. Se lava con agua y se seca el exceso de esta.
7.Adicionar varias gotas de alcohol al 96% y dejarlas de 10 a 20 segundos, para decolorar la muestra.
8. Lavar con agua para eliminar el exceso de alcohol.
9. Cubrir la placa con unas gotas de safranina durante un minuto.
10. Se enjuaga nuevamente con agua y se seca cuidadosamente la parte inferior y posterior del portaobjetos.
11. Observar al microscopio con el objetivo de 100x y aceitede inmersión.
RESULTADOS.

Soluciones en el orden de su aplicación | Reacción y aspectos de las bacterias |
| Gram-positivas | Gram-negativas |
Cristal violeta CV | Las células se tiñen de violeta |
Solucion de iodo I | Se forma un complejo CV-I dentro de las células. Las células continúan violetas |
Alcohol | Las paredes celulares se deshidratan, los poros merman, la permeabilidadde la pared celular y de la membrana disminuye, el complejo CV-I no puede salir de las células. Las células permanecen de color violeta | Se extraen lípidos de las paredes celulares, los poros se agrandan y el complejo CV-I es eliminando de la celula. Las células quedan incoloras |
Safranina | Las células no se afectan, permanecen de color violeta | Las células toman este colorante y se ponencolor rojo |

CUESTIONARIO.
1. Tinción simple: la coloración de las bacterias u otros organismos por aplicación de una sola solución de un colorante a una película fijada, o frotis, se denomina tinción simple. La película fijada se inunda con la solución del colorante durante un periodo de tiempo especificado, después del cual se lava la solución con agua y se seca la preparación con papelfiltro. Usualmente las células se tienen de manera uniforme. Sin embargo, con algunos organismos, y especialmente cuando el colorante es azul de metileno, algunos granulos del interior de la celula aparecen mas intensamente teñidos que el resto de la celula.

Tinción diferencial: los procedimientos de tinción que ponen de manifiesto diferencias entre las células microbianas o entre partes de...