tinciom gram



HISTORIA


Tinción Gram debe su conocimiento y nombre Hans Christian Joachim Gram, (1853-1938), quien fue medico danés con especialidad en bacteriología y farmacología. Gram estudio las técnicas cuando se encontraba en Berlín, el mientras observaba y analizaba los tejidos de algunos fallecidos por pulmonía se dio cuenta que algunas bacterias mantenían la coloracióny otras no, realizó la tinción con violeta de genciana, después la fijó con lugol; luego las lavó con etanol. Había bacterias que retenían el color y aparecían de color violeta al microscopio y otras que no. Más tarde Carl Weigert incorporó un nuevo paso a l proceso; añadió safranina después del lavado con etanol. De esta manera las bacterias que no retenían la coloración moradaaparecían teñidas de rojo, y fueron llamadas Gram negativo, frente a las que sí se teñían primitivamente de violeta que eran las Gram positivas. Ver figura 1












Fundamentos de diferenciación


Por medio de la microbiología se determina que aquellas bacterias que se tiñen de color azul-violeta se denominan Gram positivas, mientras que las que tiñen de color rosado o rojos sonGram negativas, La clave de su diferenciación y coloración es la capa de peptiduglacano.
Las bacterias Gram positivas tienen la ventaja de poseer una capa de peptiduglacano gruesa, además de dos clases de ácidos, lipoteitoico se encuentra anclado en la cara interna de la pared celular esta y unido a la membrana plasmática, mientras el teitoico o mureina esta situado solamente en elpeptiduglacano, esta características ayudan a la retención con mas facilidad del cristal violeta-lugol.
Al contrario las bacterias Gram negativas poseen una capa de peptiduglacano mas delgada unida a una membrana exterior de lipoproteínas, esta membrana exterior esta constituida de proteína, fosfolípidos y lipopolisacarido. Ver imagen 2

Para la identificación se maneja cristalvioleta-lugol-alcohol acetona, estos tres compuestos trabajan en conjunto haciendo la distinción mucho mas fácil de Gram positivos o negativos en una misma observación, puesto que las bacterias Gram negativas por la capa delgada no pueden retener el cristal-violeta pero si el alcohol acetona, pero en cambio las Gram positivas detienen el cristal-violeta por la capa mas gruesa y no son vulnerables alsolvente orgánico.









Teorías aplicadas

Son varias las teorías planteadas para explicar el proceso de tinción:
un microorganismo Gram positivo debe presentar una pared celular sana, de lo contrario pueden volverse Gram negativo., esto indica la importancia de la pared al retener el colorante y aclaran té.

1Combinación química entre el colorante y Las proteínas deStearn )1923) ^” los microorganismos Gram positivos tienen una escala isoeléctrica de pH inferior a la de los microorganismos gramnegativos; y, a base de sus datos experimentales, deducen las siguientes conclusiones:

Los microorganismos Gram positivos pueden hacerse gramnegativos al aumentar la acidez.
Los microorganismos gramnegativos pueden hacerse Gram positivos al aumentar la alcalinidad.Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes ácidos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la alcalinidad.
Los microorganismos de reacción positiva a los colorantes básicos pueden hacerse gramnegativos por aumentar la acidez.
En la zona isoeléctrica característica de cada especie es muy escasa la tendencia a retener cualquier colorante

Gianni (1952) comprobó que losmicroorganismos Gram positivos Bacillus subtilis y B. anthracis tomaban negativamente el Gram cuando los cultivos databan de dos a t res horas. Luego se desarrollaba la sustancia Gram positiva debajo de la pared celular, para invertir la re acción. Otra explicación de la reacción de Gram puede ser la posible existencia de una capa exterior alrededor de un núcleo Gram...