TINCION COMPUESTA

TINCION COMPUESTA
Silvia Pelayo; Wilmer Suarez
Universidad de pamplona

RESUMEN
En esta practica utilizamos dos métodos de tinción que fueron coloración de Gram y el método de Schaeffer fulton para visualizar Bacillus, S.aureus y E.coli. En la tinción de Gram observamos microorganismos bacterianos Gram positivos y Gram negativos teniendo en cuenta que los Gram positivos se pueden diferenciar delos Gram negativos porque su pared bacteriana posee una capa ancha de peptidoglicanos sobre su membrana citoplasmática mientras que en las Gram negativas su pared bacteriana es delgada. El método de Scheaffer fulton se utiliza para la tinción de esporas, estas se tiñeron de verde y las formas vegetativas de rojo.
Palabras claves: Coloración Gram, método Schaeffer fulton, Gram positivas, Gramnegativas, pared bacteriana.
INTRODUCCION
Las tinciones compuestas se utilizan ampliamente en microbiología; consisten en la aplicación de dos colorantes que contrastan en su intensidad o color y un paso intermedio que provoca una respuesta diferente entre microorganismos distintos o entre determinadas células dentro de una población. La diferenciación puede ser provocada por un agente químico ofísico, permitiendo observar dos tipos de respuestas diferentes a la tinción en una misma muestra.
Las técnicas de tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el contraste. Algunos colorantes teñirán mejor solo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo. El mordiente se combina con un constituyentecelular y lo altera de manera que ahora sí podrá atacar el colorante. 1
TINCIÓN GRAM
Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas. Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.2
Fue desarrolladapor el científico danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en día, sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.3
TINCION DE SCHAEFFER FULTON
Las endosporas bacteriana son muy resistentes a los procedimientos tintoriales usuales. La aplicación de un solo colorante a una célula bacteriana que contiene una endospora, solo tiñe lacélula, pero la espora se mantiene incolora, para lograr introducir el colorante dentro de la espora es necesario aplicar calor. La tinción de Schaeffer fulton emplea verde malaquita como colorante primario, el cual es eliminado posteriormente del resto de la célula bacteriana, pero no de la espora, mediante un enjuague con agua, como contratinción de emplea safranina, la cual tiñe la célulavegetal. 4
Materiales
Láminas o portaobjetos
Asa bacteriológicas
Fucshina o safranina
Verde de malaquita al 5%
Safranina 0.5%.
PROCEDIMIENTO
Tinción Gram
En un portaobjetos limpio se colocó una gota de agua destilada a la que con el asa de siembra, previamente esterilizada a la llama, se llevó una pequeña cantidad de la cepas que utilizamos y con el asa se extendió la gota con la cepa sobre elportaobjetos y se fijó con calor, después se le agrego cristal violeta hasta cubrir la muestra y se dejó actuar por 1 minuto, se lavó a baja presión y se cubrió con Lugol por 1 minuto, se lavó y se cubrió con alcohol cetona por 20 segundos, se lavó y se cubrió la muestra con safranina por 45 segundos y por último se lavó para después observar la muestra al microscopio.

Tinción Schaeffer fulton
MicroscopioPapel filtro
CEPAS
Escherichia coli
Staphylococccus sp
Bacillus spp (control positivo)
REACTIVOS
Cristal violeta
Lugol
Alcohol cetona
Se colocó la muestra bacteriana en un portaobjetos previamente limpiado y se le hizo un extendido y se fijó, después se cubrió con papel filtro y se le agrego verde de malaquita y se calentó hasta que expulsara los primeros vapores utilizando pinzas y el...