Tincion De Fosfatasa Alcalina

FOSFATASA ALCALINA
La tinción indica actividad de fosfatasa alcalina de leucocitos en neutrófilos, que a su vez indican actividad metabólica intracelular. Se forma un pigmento visible en el sitio dela actividad de la fosfatasa. 
La prueba ayuda a diferenciar leucemias granulociticas crónicas de reacciones leucemoides neutrofílicas.
REACTIVOS
1.- Solución fijadora:
* Formalina (formaldehidoal 40%) 10ml
* Metanol absoluto 90ml
2.- Solución madre: propanodiol 0.2M:
a) Se disuelven 10.5 g de 2-amino- 2 metil- 1.3- propanodiol en 500 ml de aguadestilada.
b) se guarda en el frigorífico.
3.- Solución de trabajo: tampón de propanodiol 0.05M. pH de 9.75:
a) se añaden 5ml de HCl 0.1N a 25 ml de solución madre de propanodiol 0.2Mb) se diluye hasta 100ml de agua destilada.
c) Se guarda en el frigorífico.
4.- mezcla de sustrato, pH 9.5 a 9.6
* o- naftil de sodio35mg
* Azul rápido RR (sal de diazonio de la 4- benzol- 2; 5 metoxi- anilina) 35mg
* Tampón de trabajo de propanoidol 0.05M, pH 9.7535ml
a) Se prepara inmediatamente antes de su uso
b) Se filtra directamente en un frasco de coplin y se utiliza enseguida
5.- Tinción de contraste: hematoxilina de Harris:a) se emplea a plena potencia y se filtra antes de usarla.

FUNDAMENTO
La FAL es una enzima que se encuentra en los gránulos secundarios de los neutrofilos. El sustrato es el naftol AS-B1 fosfatoy es hidrolizado por la enzima en presencia de un pH alcalino. Este sustrato hidrolizado, combinado con una tinción como el LB rojo- violeta rápido o el BB azul rápido produce un precipitadocoloreado en el sitio de la actividad de la enzima.
METODO:
1) Se preparan frotis de sangre de modo habitual.
2) Se sumergen los portaobjetos en fijador durante 30s y se lavan a agua corriente...