tincion de gram metodologia

MATERIALES Y MÉTODOS
Esterilización y Cultivo
Mechero fisher o similar
Asa de siembra
Tubo de cultivos bacterianos: Escherichia coli o Staphylococus aureus
Olla express (autoclave) con tripie1 Matraz Erlenmeyer de 125 ml.
10 cajas Petri estériles de plástico
Medio Luria Bertani
Preparación del Medio

1. En un matraz preparamos 100 ml. de medio Luria Bertani (LB).
2. Agitamoshasta deshacer por completo los grumos y procurando no dejar burbujas, y tapamos con aluminio de modo que sellemos la boquilla del matraz.
3. Retiramos el recipiente interno de aluminio del autoclave,y vertemos 3 l. de agua potable en la cámara externa.
4. Colocamos el matraz con la solución cultivo, junto con todos los instrumentos que fueran necesarios esterilizar.
5. Cerramos el autoclavecuidando que quede hermético y coincidente en las marcas, cerrando de 2 en 2 cada llave, y la subimos al tripie.
6. Conectamos el mechero Fisher a la toma de gas, buscamos una salida de fuegoapropiada y colocamos bajo la olla entre el tripie.
7. Esperamos a ver salir vapor y cerramos la válvula de control, adaptamos la temperatura a 240 C° y esperamos 20 min. con esa temperatura constante.8. Mientras esperamos que la presión de la olla descienda para poder abrirla, lavamos la mesa donde vamos a trabajar, secamos y esterilizamos con alcohol.
9. Prendimos el mechero sobre la mesa yaestéril y al sacar los objetos estériles del autoclave, los dirigimos junto al mechero para evitar contaminación.
10. Con las manos desinfectadas, tomamos una caja de Petri, lo más cerca posible delfuego, y de igual manera vertimos el medio de cultivo en la caja, cerramos la caja, y colocamos en un sitio limpio. Así continuamos con el resto de las cajas.
11. Esperamos a que se solidificara elmedio de cultivo. Mientras tanto fuimos a buscar muestras para analizar.
12. Con una mano, lo más cerca posible de la llama del mechero, destapamos la caja de Petri, quemamos el asa de siembra para...