Tincion de gram

Tinción Gram
Es necesario realizar esta técnica en el diagnostico microbiológico para poder identificar si el agente es una bacteria o es un hongo.
Para esto, se deben seguir los siguientes pasos:* Recoger muestras.
* Hacer el extendido en un portaobjetos
* Dejar secar a temperatura ambiente.
* Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)* Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.
* Enjuagar con agua.
*Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
* Enjuagar con agua.
* Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloración)
* Enjuagar con agua.
* Tinción decontraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
* Enjuagar con agua.
Para observar al microscopio óptico esconveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Tinción de Pass (periodic acid schiff)
Clínicamente podemos determinar la presencia de un hongo, si es así, realizaremos tinciones más específicas comola tinción de Pass.
En la tinción PAS se trata el material con ácido periódico, que oxida los 1,2 glicoles formándose grupos aldehído en los glucanos y mananos de las paredes celulares de los hongos.Con el reactivo de schiff, los aldehídos reaccionan dando un color rojo luminoso.
La técnica de Schiff, es una reacción colorimétrica que se usa comúnmente en citoquímica. Utiliza PAS, ácidoperyódico de Schiff, o leucofucsina, un colorante incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehídos.
La técnica de PAS se utiliza en los preparados para microscopia óptica, permitela tinción de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas membranas celulares, células caliciformes en la mucosa del intestino, fibras reticulares que están...