Tincion De Gram

INTRODUCCON

La tinción diferencial requiere más de un tipo de colorante y se utiliza para
distinguir entre varios tipos de células bacterianas. Una tinción diferencial típicamente
consiste de tres pasos principales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para
teñir a todas las células en la tinción; enseguida un paso de decoloración, el cual remueve el
colorante solo de ciertostipos de células y finalmente un colorante de contraste, el cual tiñe
las células recién decoloradas pero no tiene efecto sobre las células que aún retienen el
colorante primario.
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción deGram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas
Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.
Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana(cocos, bacilos, positivos, negativos, etc) se basan justamente en la tinción de GRAM.

MATERIALES

Asa de platino y/o palillos
Microscopio
Porta objetos
Aceite de inmersiónEQUIPOS

Microscopio

SUSTANCIAS/REACTIVOS
Colorante violeta cristal de Gram
Solución decolorante alcohol acetona
Safranina de Gram
Yodo de Gram o lugol para gran
Agua destilada estéril
MEDIOS DE CULTIVO

Cultivo Agar Sangre y/o A. Nutritivo
Tioglicolate con crecimiento de (Gram + y -)

TECNICA

REALIZACIÓNDEL FROTIS
1. Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
2. Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en mediosólido y transferirlo a la gota de agua. Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobreel portaobjetos.
3. Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.
A) TINCIÓN DE GRAM
1. Realiza la preparación del frotis bacteriano como se explicó en el paso anterior
2. Teñir con cristal violeta1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona hasta que la preparación deje de perder color (15-30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teñir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar lapreparación.
Examinar al microscopio con aceite de inmersión y fijándose sobre todo en el color de cada preparación



RESULTADOS

• Bacilos Gram
NOTAS Y SUGERENCIAS

CUESTONARIO

1.- ¿Qué es un frotis?
Extensión que se realiza sobre un porta objetos de una muestra o cultivo con objeto de separa lo más posible los microorganismos.

¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬2.- ¿Con qué finalidad se fija la muestra...