Tincion De Gram

Tinción de Gram
Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram.

Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad llamada Carbunco, encontrados en una muestra liquido cerebroespinal. Si hubiera una especia de bacteria Gram negativa apareceria de color rosa. El resto son leucocitos atacando lainfección.
Una tinción Gram en la que observamos un mezclado de Staphylococcus aureus(Coco Gram positivo) y Escherichia coli(bacilo Gram negative)
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnicaen 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positivaa las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
* Recoger muestras.
* Hacer el extendido en espiral.
*Dejar secar a temperatura ambiente.
* Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
* Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.
* Enjuagar con agua.
* Agregar lugol y esperar entre 1 minuto.
* Enjuagar con agua.
*Agregar acetona y/o alcohol y esperar 4 segundos (parte critica de la coloracion)
* Enjuagar con agua.
* Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Bacterias resistentes a la tinción Gram
Lassiguientes bacterias de naturaleza grampositiva, tiñen como gramnegativas:
* Mycobacterias (están encapsuladas).
* Mycoplasmas (no tienen pared).
* Formas L (pérdida ocasional de la pared).
* Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared, respectivamente).

Utilidades
En el análisis de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir variasfunciones:
* Identificación preliminar de la bacteria causal de la infección.
* Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos bacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor número de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivosempleados así como la atmósfera de incubación.
A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los cocos son de forma esférica. Pueden aparecer aislados después de la división celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos).
Los bacilos poseen forma alargada. En general suelenagruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada.
También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rígida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibrios.
Fundamentos de diferenciación de Gram positivo y Gram negativo
Los fundamentos de la técnica se basan en lasdiferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado...