Tincion de GRAM

Tinción de BACTERIAS





I. INTRODUCCIÓN

Los microorganismos, en este caso las bacterias, pueden observarse directamente al microscopio de campo claro. Sin embargo, debido al bajo contraste entre las células y su entorno, estos procedimientos se utilizan en ocasiones muy limitadas
La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno y por lotanto contribuye a mejorar la imagen observada. Las técnicas de tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el contraste
En Microbiología todas las tinciones se realizan a partir de suspensiones de microorganismos extendidas en un portaobjetos, secadas y fijadas. La fijación es un procedimiento que permite preservar estructuras celulares, se puede llevar a cabocon diferentes tratamientos: fijación por calor o fijación química. La fijación por calor es la más utilizada para la observación de bacterias. Este procedimiento consiste en pasar el portaobjetos, con la suspensión bacteriana extendida y seca, a través de una llama de un mechero. La fijación por calor preserva la morfología externa de los microorganismos pero no las estructuras internas. Lafijación química con agentes como etanol, formaldehido y ácido acético entre otros muchos, se utiliza para preservar las estructuras celulares.
Los colorantes son sales compuestas por un ion positivo y un ion negativo, uno de los cuales esta coloreado y se conoce como cromóforo. El color de los denominados colorantes básicos esta en el ion positivo; en los colorantes ácidos, está en el ion negativo.En un pH 7 las bacterias presentan una carga levemente negativa. Por lo tanto, el ion positivo coloreado en un colorante básico es atraído hacia la célula bacteriana con carga negativa. Los colorantes básicos, entre los que se encuentran el violeta de genciana (cristal violeta), el azul de metileno, el verde de malaquita y la safrinina, se utilizan con más frecuencia que los colorantes ácidos.Estos últimos no son atraídos por la mayor parte de los tipos de bacterias porque la superficie bacteriana con carga negativa repele los iones del colorante, de modo que este tiñe el fondo en lugar de la estructura bacteriana (Tortora, 2007).
Objetivos:
- Realizar un correcto manejo de los materiales del laboratorio para obtener mejores resultados.
-Fijar la muestra problema para su posteriorcoloración y visualización al microscopio.
- Mediante los diferentes tintes identificar que tipo de bacteria se esta observando gracias a su morfología.


II. MATERIALES Y MÉTODOS.

a. Materiales:

i. Preparación de una muestra fija.
- Muestra conteniendo bacterias (E. coli, Staphylococcus aureus, bacillus cereus)
-Asa de kolle
-Lamina porta objeto
-Mechero de alcohol
-Piseta con aguaii. Tinción simple con colorantes.
- Laminas fijas de microorganismos
-Aceite de inmersión
-Colorantes básicos (azul de metileno, cristal violeta, carbolfucsina)
-Papel secante
-Piseta de agua
-Soporte para tinción

b. Metodo:

i. Prepacion de muestra fija.
a) Coloque una gota de agua sobre una lámina porta objeto completamente limpia. Con ayuda del asa de kolle coloque sobre lagota una pequeña porción de la muestra a fijar. Si la muestra que contiene al microorganismo es liquida, puede aplicarse directamente sin la gota de agua.
b) Distribuya la gota cargada con la muestra en la lámina hasta formar una película delgada.
c) Seque la lámina al aire o a una razonable distancia sobre la llama del mechero.
d) Cuando la película este seca, pase la lamina a través de la llamadel mechero unas tres veces, cuidando que la película este hacia arriba y que la lámina no se recaliente. La sobreexposición al calor puede alterar la forma y estructura del microorganismo.
ii. Tinción simple con colorante.
a) Coloque las láminas fijas de microorganismos sobre el soporte para tinción.
b) Agregue 5 o 6 gotas de cada colorante dejando que actúen por un tiempo de 30 segundos...