TINCION DE GRAM

TINCION DE GRAM
Arévalo López Yessenia Abigail
Escobar Vega Andrés Paúl
Laboratorio de Microbiología de Alimentos I, Facultad de Ciencia e Ingeniera en Alimentos
Universidad Técnica de Ambato

Resumen
En esta práctica se identificaron las técnicas de tinción de gram, en las que se utilizaron varios tipos de tintes como violeta de cristal, lugol y safranina los cuales se los colocaron en lasmuestras por diferentes tiempos y con sus respectivos enjuagues. Después de haber dejado la muestra teñida reposar hasta que se seque el líquido se procedió a observar la placa en el microscopio empezando desde el lente de menor aumento hasta el de mayor aumento con ayuda del aceite de inmersión, obteniendo las primeras dos placas bacterias gram-positivas y la última una bacteria gram-negativa.Introducción
Debe su nombre al Bacteriologo Danés Christian Gram que la desarrollo en 1844. Es una tinción diferencial, clasificando a las bacterias en Gram + y Gram -, de acuerdo a las propiedades de su pared celular. (SOGAARD; 2007).
El objetivo de Gram era conseguir una prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para así poder estudiarlas y clasificarlas. Laprueba resultó todo un éxito y pronto se convirtió en una técnica muy útil no solo para el estudio de las bacterias, sino también para poder identificarlas rápidamente en una infección y seleccionar el antibiótico más adecuado para tratarla. (BERGEY; 1994).
La mayor parte de las muestras sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana deben ser extendidas en frotis sobre laminillas devidrio, teñidas y examinadas en el microscopio. (AULTON; 2004). Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta (colorante básico), lugol (mordiente), alcohol cetona (decolorante) y safranina (colorante de contraste). (MADIGAN; 2004).
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con ayuda del mordiente (lugol) que refuerza la unión delcolorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al microscopio. (del Valle, Hannig, Vial, Montiel, & Cerda, 1985)
Las bacterias Gram negativas pierden el colorantebásico cuando son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del complejo cristal violeta-lugol. (Ferre et al., 2011) Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.(Giglio Maira, Fernández Valdés, Correa, Camacho Ballacey, & Rojas, 1998)
Varias son las teorías emitidas para explicar el mecanismo de la tinción de Gram. Stearn (1923) basó la suya en una combinación química entre el colorante y las proteínas de las bacterias (Guzmán, 2004)
Gianni (1952) comprobó que los microorganismos grampositivos Bacillus subtilis y B. anthracis tomaban negativamente el Gramcuando los cultivos databan de dos a tres horas. (Koneman & Allen, 2008)
Se recomienda realizar una tinción de Gram en todas las situaciones en las que se quiera hacer una primera aproximación en la clasificación de las bacterias aisladas. además de realizarla en estudios de investigación (Majalca-Martínez, Rivera-Cabrera, Ochoa-Pérez, & Giono-Cerezo, 2001)
La tinción de Gram también tiene ciertaslimitaciones. Algunas bacterias no tienen pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrán identificar, al igual que los virus. En esos casos la tinción no coloreará ningún germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infección. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiológico que se acompaña siempre de un...